1. 研究目的与意义
本益视明目颗粒是由南通中医院老中医多年经验总结所得。多项研究认为视疲劳中药基本配伍规律常为补虚药、清热药、解表药、利水渗湿药，其中卜文超[1]认为肝肾不足型且其证重者加熟地黄、菟丝子。益视明目颗粒的处方中以枸杞子、熟地黄、当归、菟丝子、川芎、山药、茯神为核心药物。其中枸杞子、当归、党参、女贞子、菟丝子、炒白芍、熟地黄滋阴益肾、补血养肝，珍珠母、丹参、川芎清肝明目、活血化瘀，远志、石菖蒲、茯神安神定志[2]。益视明目颗粒多药合用，针对多种病因引起的视疲劳尤其是青少年假性近视疗效显著。并且为方便患者携带和服用，提高药效以及患者服药的顺应性，将中药制成颗粒剂。
参考多项文献资料，大多是对单一药材中的主成分进行含量测定，而主成分在其复方颗粒中的鉴别与含量测定尚缺少研究。本课题验旨在对颗粒剂中主要治疗药物以及其主要有效成分优化鉴别和含量测定方法并拟定其质量标准，为益视明目颗粒的生产、推广、应用提供依据。处方中枸杞子滋补肝肾，益精明目主，用于虚劳精亏，目昏不明。而这些作用与枸杞多糖(LBP)密切相关[3]，多糖是枸杞子生物学作用的主要有效成分[4]。处方中丹参作为活血化瘀的中药，起活血通经，清心除烦之效。益视明目颗粒是丹参水提物的复方制剂，其水溶性主要有效成分为丹参素及丹参酚酸类。为控制本品质量，选择枸杞多糖以及丹参素作为控制本品的指标成分。
课题以药典、以往文献为基础，将益视明目颗粒样品液，在不同展开剂中观察Rf、拖尾与否、展开斑点大小等情况，以此来优化鉴别展开条件。 课题根据当前药典对丹参及其制剂中丹参素含量测定方法的空白，参考往年文献资料，针对HPLC方法中的流动相条件进行比较，验证优化后测定条件的优越性，为今后该颗粒剂中的含量测定以及质量标准制定提供依据。
2. 文献综述
益视明目颗粒剂的成分研究
南京中医药大学 冯亚明042012133
摘 要:目的: 建立益视明目颗粒中枸杞子和丹参的鉴别以及丹参（丹参素）的含量测定方法。方法：采用TLC法对枸杞子和丹参进行鉴别，采用高效液相色谱法对丹参（丹参素）进行含量测定。结论: 本方法简便、准确、专属性强，可以作为该颗粒剂的质量控制方法。
关键词：益视明目颗粒；枸杞子；丹参；鉴别；含量测定
1．选题背景
现所用的益视明目颗粒的处方中以枸杞子、熟地黄、当归、菟丝子、川芎、山药、茯神为核心药物。其中枸杞子、当归、党参、女贞子、菟丝子、炒白芍、熟地黄滋阴益肾、补血养肝，珍珠母、丹参、川芎清肝明目、活血化瘀，远志、石菖蒲、茯神安神定志[1]。益视明目颗粒多药合用，针对多种病因引起的视疲劳尤其是青少年假性近视疗效显著。根据《2015版中国药典第一部》中，中药及其制剂的鉴别、含量测定方法，优化益视明目颗粒中君药枸杞子、丹参的鉴别和丹参（丹参素）的含量测定方法[2]，为其质量标准的制定提供依据。
2．国内外研究进展
2.1颗粒中枸杞子、丹参的鉴别研究
经历代医家总结并结合现代医疗手段，多认为视疲劳的证型以虚证及虚实错杂证为主，以肝血不足、肝肾阴亏，脾胃虚弱、气血瘀滞为基础，而过用目力、劳心伤神则是其发病诱因[3]。针对病症，颗粒剂处方中加入滋补肝肾、益精明目的枸杞子以及活血通经的丹参。
枸杞子含有枸杞多糖、甜菜碱、胡萝卜素[4]等，参考2015版中国药典第一部关于枸杞子薄层法鉴别内容[2]并结合近年文献对6种展开剂①乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3:2:1） [5]， ②乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（4:6:0.3） [6]， ③乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（2.5:6:0.5） [7]， ④苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（4:1:5:0.5） [8] ⑤乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸（10:25:1）[9]， ⑥甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6:4:0.2） [10]进行比较试验，通过观察斑点大小、拖尾情况、Rf值等情况分析合适益视明目颗粒中枸杞子鉴别的薄层展开剂条件。 丹参中含有丹酚酸、丹参素、原儿茶醛等水溶性成分及丹参酮IIA、丹参酮IIB等脂溶性成分，根据益视明目颗粒制备工艺，参考2015版中国药典第一部关于丹参薄层鉴别内容[2]及有关文献资料[11] [12]，摸索展开、检视条件。
将上述丹参、枸杞子薄层鉴别条件结合，进一步优化完善益视明目颗粒中君药成分的鉴别条件，为本颗粒的质量标准制定，提供依据。
2.2颗粒中丹参（丹参素）的含量测定研究
益视明目颗粒采取传统水煎煮法作为有效成分提取方法，且实验表明采用传统水煎煮法丹参素提取总量最高[13]，所以本颗粒丹参含量测定以水溶性成分丹参素（钠）为质控标准。
2.2.1丹参素含量测定方法的比较
2.2.1.1纸层析比色法
参考赵学岚等采用的条件[14]，选择醋酸-10%NaCl溶液（5:95）作为展开剂，纸层析分离后用0.5%异菸肼显色，剪下斑点洗脱后于495 3nm处测定。
2.2.1.2薄层扫描法
参考近年来含丹参的制剂标准的统计分析[15]，大多数以丹参酚酸、丹参酮IIA为指标，而根据益视明目颗粒的制备工艺，应采用丹参素（钠）为指标。复方丹参滴丸选择三氯甲烷-丙酮-甲酸（25:10:4）为展开剂，用氨蒸汽熏后于365nm下测定；心通口服液选择苯-乙酸乙酯-甲酸（30:10:4）为展开剂，喷2%三氯化铁-1%铁氰化钠（1:1）的混合溶液后检视。
实验证明，该方法操作简单、分离效能好、准确，但重现性较差，可做参考[16]。
2.2.1.3高效液相法
参考今年关于丹参素含量测定研究，王杰民等采用YWG-C18反相色谱柱，选择甲醇-0.25%的醋酸溶液为流动相，检测波长280nm，对羟基苯甲酸为内标，梯度洗脱测定了丹参药材和饮片中丹参素的含量[17]；盛景芬等采用Li-chrosorb反相色谱柱，选择甲醇-0.5%醋酸(10：70)为流动相，检测波281nm，对羟基苯甲酸为内标物，直接测定了丹参注射液及复方丹参注射液中丹参素的含量[18]。倪坤仪等采用μBondapak C18柱和国产YWG-C18反相色谱柱，以水-甲醇-冰醋酸(80：19： 1)为流动相，检测波长280nm，测定丹参及其复方丹参注射液中丹参素的含量[19]。
与薄层扫描法相比，在原来已有优点的基础上，重现性更好、精密度更高，是一般丹参制剂中丹参素含量测定的首选方法。
2.2.2丹参素含量测定
参考上述高效液相文献，本实验采用Kromasil C18柱（4.6250mm，5μm），选择甲醇（A）-0.5%醋酸水溶液（B）为流动相按下表梯度洗脱，检测波长280nm，流速为1.0mL/min，柱温30℃。
时间（min） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0 | 10 | 90 |
11 | 10 | 90 |
11.5 | 50 | 50 |
13 | 90 | 10 |
25 | 90 | 10 |
26 | 10 | 90 |
30 | 10 | 90 |
同时比较固定流动相甲醇-0.5%醋酸水溶液（10:90）洗脱时的重复性、精密度等方面，优化含量测定条件。
3．讨论
3.1益视明目颗粒的配方依据
多项研究认为视疲劳中药基本配伍规律常为补虚药、清热药、解表药、利水渗湿药，其中卜文超[20]认为肝肾不足型且其证重者加熟地黄、菟丝子。根据视疲劳的主要病机，补虚类药物中补气药、补血药，可益气养血、补益肝肾、滋阴养血、健脾益气等功效；清热类药物主清热滋阴凉血、泻火药，可对肾阴不足、肝阳上亢[21]。历代医家多采取攻补兼施的方法，针对不同致病因素导致的视疲劳在针对主要病因治疗时也兼顾其他症状，由气血津液可以相互转化的关系而分别采取滋补肝肾、健脾升阳、滋阴养血、疏肝理气等方法。
3.2高效液相色谱法特点
高效液相色谱法有三高一广一快的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，高效液相色谱的缺点是有柱外效应。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。
3.3.其他
随着时代飞速发展，青少年的用眼问题越来越引起广泛关注。益视明目颗粒作为结合历代经验和现代中医理论用于治疗视疲劳的有效处方制剂，但目前尚以普通颗粒剂要求为标准，缺少特定的定性、定量标准，所以本课题着重参考以往文献对其中枸杞子、丹参君药进行鉴别和含量测定并优化方法，为制定其质量标准提供依据。
[参考文献]
[1]徐勇，戢翰升．炒麦芽含药血清对MMQ大鼠垂体刘细胞NGF、PRL分泌的影响[J]．
中国临床神经外科杂志，2007，12（12）：736-738
[2]中国药典[S] .一部，2015:119，292，通则0502．
[3]周丽.视疲劳综合征的中医药研究［A］山东中医杂志，2006，25（12）：807-809
[4] 卫生部药品标准[S].中药成方制剂. 第十二册，1997:159
[5] 中国药典[S] .一部，2015:292，通则0502
[6] 王春红 . 补血胶囊的TLC定性鉴别[J]. 湖北中医杂志，2002,24（4）：51
[7] 蔡淑清，丁焕民，刘春梅，等. 前列康舒胶囊质量标准的研究[J]. 中华临床药师与护理，2004,2（4）：15
[8] 徐韧柳，康怀萍. 羊羔美酒中枸杞子和何首乌的薄层色谱鉴别[J]. 中国药业，2001，10（3）：28
[9] 杨南松，孙照普，王玉庆. 黄精赞育胶囊质量标准的研究[J]. 中草药，2002,33（9）：798
[10] 邹俊. 增精丸薄层色谱鉴别[J]. 中国药事，2005,19（11）：679
[11] 阴健 . 中药现代研究与临床应用（2）[M]. 人民卫生出版社
[12] 王宝枼. 中成药质量标准与标准物质研究[M]. 中国医药科技出版社：11
[13] 刘重芳，张钰泉，朱艳等. 丹参不同提取工艺比较[J]. 中成药，1999,21（8）：385
[14] 赵学岚，崔吉卫，高希章. 纸层析定量测定丹参注射液中有效成分丹参素含量方法的探讨[J]. 中成药研究，1987（7）：22
[15] 肖禾，宋民宪，赖娟. 国家药品标准中丹参的质量控制情况[A]. 中国药事，2006，20（1）：57-58
[16] 崔艳萍. 丹参及其制剂中有效成分测定方法的研究进展. 中草药，1996,27（8）：503
[17] 王杰民，何怀冰，竺叶青等. RP-HPLC法测定丹参药材中丹参素及原儿茶醛含量[J]. 上海医科大学学报，1991,18（1）：27
[18] 盛景芬，徐晓华. 高效液相色谱法测定丹参注射液中的原儿茶醛和丹参素[J]. 中成药研究，1987,9（7）：14
[19] 倪坤仪，张国清. 反相高效液相色谱测定丹参注射剂的三种有效成分. 药学学报，1988,23（4）：293
[20] 卜文超.养目汤治疗眼疲劳的临床观察［J］云南中医学院学报，2001，24（2）：26-27
[21］庞万敏.视疲劳证治［J］河北中医，1982，（2）：37-39
3. 设计方案和技术路线
1 枸杞子、丹参的鉴别
1.1颗粒剂中枸杞子、丹参的鉴别 1.1.1 仪器：硅胶G薄层板、点样器、展开溶液、检视装置
1.1.2 材料：益视明目颗粒、枸杞子药材、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲酸
4. 工作计划
3.4-3.8 查阅并整理文献资料
3.9-3.15 完成开题报告
3.16-5.31 进行课题实验
5. 难点与创新点
4.1 本课题处方是在经典方基础上改变了茯神的使用以及其他主药的比例，重新对处方进行了组方，通过优化成分鉴定以及含量测定方法验证质量标准，为其临床疗效发挥作用提供科学依据。
4.2 本课题实验选择颗粒剂为剂型，中药颗粒剂是在中药汤剂和糖浆等剂型的基础上发展起来的，与其他剂型相比有着比较明显的优势，具有溶解释放迅速、吸收利用良好、毒副作用小，且制备工艺简单、便于工业化生产，患者携带使用方便。
4.3 本课题实验TLC法对处方中枸杞子、丹参进行鉴定，运用紫外分光光度法对主要成分枸杞多糖进行含量测定，根据以往的文献经历优化了TLC中展开剂的选择以及枸杞多糖提取精制的条件。同时采用HPLC法针对当前药典对丹参中尤其是丹参制剂中丹参素含量测定的空白，参考多项资料，通过比较流动相条件优化含量测定方法，为该制剂中丹参素主成分含量测定提供依据。
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