1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
马铃薯甲虫（Leptinotarsa decemlineata，Colorado potato beetle）属鞘翅目，叶甲科，是一种极具毁灭性的外来有害生物。
1857 年，该虫严重危害马铃薯，引起人们的注意，随后迅速扩散，分布于北美几乎所有马铃薯种植区，包括美国、加拿大南部、墨西哥和危地马拉北部。
从 1876 年起，马铃薯甲虫开始出现在欧洲大陆，于 1922 年成功定殖于法国波尔多市后，扩展到整个欧洲大陆和中亚部分地区。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：烟碱型乙酰胆碱受体( nicotinic acetylcholine receptors，nAChRs) 属于配体门控离子通道，在昆虫突触兴奋性神经传递过程中起重要作用，也是新烟碱类常用杀虫剂的作用靶标。
通过RNAi沉默马铃薯甲虫nAChRα1靶基因后，分析干扰对靶基因表达量的影响，研究结果将为揭示昆虫nAChR的亚基功能、马铃薯甲虫对新烟碱类药剂的作用机理及防控技术提供重要理论依据。
研究内容：1、利用北疆地区的马铃薯甲虫为研究对象，将构建表达dsLdα1的大肠杆菌用喂食马铃薯甲虫。
3. 研究的方法与方案
研究方法：1.总RNA提取（按照Trizol试剂说明进行）2.cDNA的合成（以总RNA为模板）3.引物设计（引物验证和RACE特异性引物利用Primer Premier 5.0 软件设计，实时定量 PCR引物采用 Beacon Designer 软件设计，送公司合成）4.实时荧光定量 PCR（采用ABI 7500实时 PCR系统，以SYBR Green为染料进行荧光定量PCR反应测定。
）技术路线：实验基础及背景：获得喂食过dsLdα1大肠杆菌菌液的马铃薯甲虫虫体、获得喂表达gfp的菌液对照组（gfp）虫体、获得空白对照组（ck）虫体。
→实验前提：冷冻保存（-70℃）→提取总RNA→以总RNA为模板，反转录获得cDNA→设计定量PCR引物，完成实时荧光定量PCR→数据统计及处理实验方案： 1.从NCBI中查找到马铃薯甲虫nAchRα1亚基cDNA全长序列。
4. 研究创新点
特色或创新之处RNA干扰（RNAi）是近年来蓬勃兴起的一项基因沉默技术，即利用外源双链RNA（dsRNA）介导的靶标基因干扰，由于其所具有的特异性和高效性，以及操作技术日益成熟简单化，已经广泛用于多种生物基因功能的研究。
本课题以马铃薯甲虫为研究对象，通过构建nAChRα1基因dsRNA表达载体，并利用实时荧光定量PCR 技术分析饲喂后靶标基因的表达量情况，从而获得马铃薯甲虫nAChR基因的 RNA干扰体系。
为马铃薯甲虫 nAChR 亚基功能以及对新烟碱类药剂靶标抗性机制的研究提供重要基础。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2014年9月在实验室获得由导师及师姐从新疆农科院实验实习基地带回的RNA干扰后的马铃薯甲虫成虫、幼虫，冷冻保存处理。
2014年9月--10月 按照Trizol试剂说明进行马铃薯甲虫的总RNA提取。
以总RNA为模板,进行反转录,用于烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基cDNA的克隆。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
