1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
近年来，因三聚氰胺（melamine，MA）被违法添加到饲料和食品中而引起中毒的事件频频发生。2007年，美国的宠物饲料污染事件导致大量猫、狗肾衰竭死亡[1]；2008年，三鹿奶粉事件使得超过5.4万名婴幼儿因可能的肾小管堵塞和肾结石等尿路疾病而寻求治疗[2]；从而使人们对动物产品中三聚氰胺的残留及危害引起重视。
三聚氰胺（melamine，MA）又名2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，主要用于合成三聚氰胺甲醛树脂，其作为工业原料还普遍存在于塑料、涂料等材料中[3]。毒理学研究表明，动物长期大量摄入三聚氰胺会造成泌尿系统损害，引起肾小管间质性肾炎、膀胱和肾结石，进一步可引起细胞增生并诱发膀胱癌[4]，严重时可引起死亡。
目前，对于三聚氰胺毒性毒理的研究多数为实验动物研究，集中在三聚氰胺和三聚氰酸联合导致机体肾脏的损伤。三聚氰胺和三聚氰酸混合毒性可导致肾小管出现冰晶状结石，严重者导致肾功能衰竭，并伴有肾小管上皮细胞坏死、凋亡和炎症反应[5,6]。但对于肾小管上皮细胞的坏死和凋亡是由于三聚氰胺的毒性单独造成的，还是三聚氰胺和三聚氰酸形成的混合物形成结晶后堵塞在肾小管内继发引起的，目前还存在争议，而且对于引起肾小管凋亡的调节仍然不清楚。本实验通过离体培养肾小管上皮细胞NRK52e来探讨单独三聚氰胺是否可以导致肾小管上皮细胞凋亡，并对导致凋亡的机制进行研究，以期进一步补充三聚氰胺造成肾脏毒性的机制研究。
2. 研究的基本内容和问题
一．研究目标
三聚氰胺引起肾小管上皮细胞NRK52e凋亡的调节机制。
二．研究内容
3. 研究的方法与方案
一．研究方法
1.将三聚氰胺直接溶解于LOWDMEM培养基中，稀释至18mM。
2.用18mM三聚氰胺分别作用于细胞0h、24h、48h、72h后，裂解收集蛋白。
4. 研究创新点
通过检测相关蛋白和酶来确定三聚氰胺的凋亡途径是否有死亡受体途径、线粒体途径、内质网途径、Caspase非依赖性途径，从而进一步了解三聚氰胺引起肾脏细胞凋亡的调节机制。
5. 研究计划与进展
2014年02月2014年03月
查阅文献资料
2014年03月2014年04月
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