1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题意义:在我国,绝大多数狂犬病均由动物传播给人或其它动物,而动物狂犬病多以农村等不发达地区多发。
动物狂犬病的快速检测试纸确诊是后续措施制定的前提,现场诊断时狂犬病处置的重要环节。
狂犬病的检测为免疫荧光法 (FAT),也有基于RT-PCR的核酸检测技术,但这两种方法均需要在实验室由专业人员操作,且用时较长(2到6小时不等),在一定程度上影响狂犬病暴露后处置的针对性和有效性。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题:目标:结合抗原抗体特异结合原理和胶体金层析技术, 研制检测狂犬病病毒的胶体金检测试纸,用于临床疑似狂犬的快速诊断。
内容:1. 理解双抗体夹心法免疫胶体金试纸条检测抗原的原理[1],并根据原理设计和安排实验计划。
2. 准备实验相关的试剂、器材、药品、动物等。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析:研究方法:亲和层析法纯化抗狂犬病毒核蛋白和磷蛋白单克隆抗体,羊抗鼠IgG,并制备金标抗核蛋白单克隆抗体;采用特殊的生产工艺, 在玻璃纤维膜包被金标抗体, 在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG, 制成狂犬病抗原免疫胶体金检测试纸,以检测狂犬病毒。
通过检测多种不同阴性和阳性样品,确定检测试纸是否成立。
并通过优化各反应条件,提高检测试纸的特异性、灵敏性、稳定性和保质期,以使其能进行批量生产,进入市场,在一定水平内准确检测狂犬病毒及相关抗原。
4. 研究创新点
特色或创新之处:1. 市场上还没有供应2. 检测试纸检测时间由FAT的2小时缩短到15min。
3. 基于双单抗,提高检测的特异性。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展:2014.2.24-2014.3.2:熟悉实验室环境和学习实验室基本要求和注意事项。
2014.3.3-2014.3.9:查阅相关文献资料,学习检测试纸的制备方法。
2014.3.10-2014.3.23:纯化三种McAb,确定金标抗体的最适蛋白浓度,制备金标抗体并检测其工作性能;组装检测试纸,通过检测已知的阴、阳性样品确定检测试纸是否成立。
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