1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪链球菌（Streptococcus suis）是一种革兰氏阳性菌，在全世界广泛分布，可以引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎及急性死亡，也可导致生猪从业人员感染和死亡，是一种重要的人畜共患病病原[1,2]。
根据荚膜多糖抗原的不同，猪链球菌分为33个血清型，其中猪链球菌2型（SS2）流行最广，从发病动物中分离率最高[2]。
获得准确基因组信息有助于阐明猪链球菌的致病机制。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标1.1构建SSU0647与GFP融合重组质粒0647::GFP；1.2通过碱基定点缺失技术构建SSU0647新旧起始密码子后A碱基缺失质粒0647::GFP-m1和0647::GFP-m2；1.3将0647::GFP、0647::GFP-m1和0647::GFP-m2分别电转化猪链球菌P1/7，通过Western blot确定正确的起始密码子，修正基因组。
2.研究内容2.1构建融合重组质粒0647::GFP通过融合PCR技术获得0647::GFP基因融合片段，并与pSET4s质粒连接。
2.2构建SSU0647新旧起始密码子后A碱基缺失质粒0647::GFP-m1和0647::GFP-m2 通过定点缺失技术，以0647::GFP重组质粒为模版，构建SSU0647新旧起始密码子后A碱基缺失质粒0647::GFP-m1和0647::GFP-m2。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法1.1构建0647::GFP融合重组质粒1.1.1引物设计：引物A与B用于扩增SSU0647片段，引物C与D用于扩增GFP基因。
引物A与D 5'端分别添加酶切位点PstI与BamHI，引物C 5'端需要添加引物B的反向互补序列，以便SSU0647和GFP片段融合。
1.1.2融合PCR：用引物A和B，C和D分别扩增SSU0647与GFP片段，并回收PCR产物。
4. 研究创新点
目前，GFP作为一种指示基因已经得到广泛应用，而本课题将绿色荧光蛋白融合与碱基定点缺失技术相结合，根据前期转录起始位点测序与链特异性转录组测序结果，对猪链球菌毒力株P1/7基因组注解进行验证和修正，研究内容富有新意。
5. 研究计划与进展
1.研究计划2012年3月-2012年4月：构建0647::GFP、0647::GFP-m1、0647::GFP-m2重组质粒；2012年4月-2012年5月：通过Western blot确定正确的起始密码子。
2. 预期研究结果：Western Blot结果应为：0647::GFP与0647::GFP-m1可以检测出相应条带，pEST4s与0647::GFP-m2无条带，说明旧起始密码子错误，新起始密码子正确。
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