1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1． 课题的意义随着分子生物学的快速发展，人们发现恶性肿瘤的发生、发展与多种因素有关，其中重要因素之一是癌基因和抑癌基因的异常表达。
近30年的研究显示，抑癌蛋白p53在很多生理反应中发挥关键的作用，而它在大多数人类癌症中却被突变或失活了。
因此寻找能使p53的再激活的物质成为癌症治疗中一个有吸引力的策略。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标培养犬细胞系，运用分子生物学技术，鉴定MDM2的新型同源异构体，为宠物临床治疗和人的肿瘤研究提供参考。
2. 研究内容（1）培养犬细胞系MDCK和CF2TH；（2）试剂盒提取mRNA；（3）实时定量RT-PCR分析检测MDM2 mRNA；（4）克隆MDM2基因到真核表达载体；（5）基因测序，并分析。
3. 拟解决的关键问题在犬细胞系中鉴定出MDM2的新型同源异构体。
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法本实验采用RT-PCR及琼脂糖凝胶电泳的方法鉴定犬细胞中MDM2的新型同源异构体，并将其克隆到真核载体中进行基因测序，确定其序列并分析。
2. 技术路线培养犬细胞系MDCK和CF2TH；提取mRNA；通过RT获得cDNA；PCR扩增MDM2的DNA片段；电泳检查MDM2的mRNA 剪切变异株；克隆MDM2基因到真核表达载体pCDNA3.1里；基因测序，分析。
3. 实验方案（1）培养细胞：本实验拟使用犬肾细胞MDCK细胞系和犬胚胎胸腺细胞cf2th细胞系。
4. 研究创新点
本实验首次将犬细胞做为研究对象，鉴定MDM2的新型同源异构体，对犬肿瘤的临床治疗具有指导意义。
此外，通过基因组的比较，人们发现比起小鼠的基因组，犬基因组与人类的相似度更高，且很多犬的肿瘤与人的非常相似，犬与人类的生活环境也很类似等，这些意味着利用犬的细胞来研究人类肿瘤的可行性很高。
因此本实验对于人类肿瘤研究也具有重要参考意义。
5. 研究计划与进展
2014年1-2月：查阅相关文献；2014年2月-2014年3月：熟悉操作流程，初步建立实验方法；2014年3月-2014年4月：培养细胞，并进行RT-PCR检测；2014年4月-2014年5月：克隆基因到载体，进行基因测序；2014年5月15日-6月初：整理实验数据，总结实验成果，撰写毕业论文。
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