1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
近年来,我国在动物疾病的防控方面已经取得了不小的成绩,但是各类畜禽疾病如禽流感、口蹄疫、猪瘟等仍然在各地频繁爆发,给我国畜牧养殖业带来重大损失。
现阶段,疫苗是防控动物疾病的主要手段,而绝大多数疫苗需要在免疫增强剂的辅助下才能发挥良好的功效,因此兽用免疫增强剂的研究和开发工作在我国畜禽疾病防控工作中的地位越发重要。
传统兽用免疫增强剂存在着靶点单一、易蓄积等缺点。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:本课题在前期研究的基础上,首先采用水提醇沉、三氯乙酸去蛋白、DEAE柱层析的方法制备均一性黄芪中性多糖,然后MTT法研究黄芪多糖体外对未成熟小鼠髓源树突状细胞(mBM-DCs)的增殖作用,采用倒置显微镜和扫描电镜观察多糖对细胞形态学的影响,为研究黄芪多糖的免疫增强活性提供依据。
研究内容:1.黄芪中性多糖的制备。
2.黄芪多糖对未成熟mBM-DCs细胞增殖的影响。
3. 研究的方法与方案
研究方法:包括水提醇沉法、三氯乙酸去蛋白法、DEAE柱层析的方法、MTT法。
技术路线:黄芪多糖的提取→黄芪多糖的分离纯化→dcs的分离培养→对未成熟细胞增殖的影响和对细胞形态的影响实验方案:1.精制黄芪多糖的制备取黄芪饮片1kg在55摄氏度鼓风干燥箱中干燥12h后粉碎,用6倍量95%乙醇浸泡过夜,水浴加热,回流三次,每次两小时,至回流液接近无色,药渣晾干,加入20倍水煎煮三次,每次两小时,合并滤液,浓缩至1000ml,离心去除杂质,缓慢加入95%乙醇至溶液含醇量为80%,边加边搅拌,静置过夜,抽滤取沉淀,置烘箱烘干。
称取粗黄芪粗多糖,研碎,加水超声处理使之充分溶解,向该溶液中加入10%的氢氧化钠溶液调节PH至7中性,再加入3%的三氯乙酸使之占溶液浓度的7.5%, 再4℃摄氏度下静置4小时,3000rpm离心20min,如此重复6次去除至茚三酮反应为阴性蛋白。
4. 研究创新点
特色或创新之处:mBM-DCs是目前免疫学研究的热点之一,中药多糖对其功能的调控作用尚处开展阶段,相关报道不多。
本课题在前期已有的研究基础上,运用药物合成的方法制备均一性黄芪中性多糖,再运用细胞生物学和免疫学的相关技术,首次研究均一性黄芪中性多糖体外对未成熟mBM-DCs功能的调控作用,能够为进一步揭示黄芪多糖的免疫促进作用提供科学依据。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展:2014.2.25-2014.3.31提取、分离纯化黄芪多糖,制备精制黄芪多糖2014.4.1-2104.5.20黄芪中性多糖对未成熟mBM-DCs功能调控作用的研究。
以上是毕业论文开题报告,课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。