1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
树突状细胞(dendriticcells，DCs) 于1973年被Steinman和Cohn首次从脾脏中分离出来，因其形态上具有许多树突状突起而得名。作为免疫系统中功能最强大的专职抗原提呈细胞(antigen-presenting cells，APC)[1]，DC被认为是维系固有免疫和适应性免疫的关键媒介[2-3]。
DCs是一群高度异质性细胞，各亚群具有不同的表型和细胞功能，可被划分为经典DCs(conventional DCs，cDCs) 、浆细胞样DCs(plasmacytoid DCs，pDCs) 、Langerhans细胞(LCs) 和单核来源的DCs四个类型[4]。cDCs具有典型的树突状形态，细胞表面表达高水平的MHC-I、MHC-II类分子和整合素CD11c。cDCs在稳态条件下主要存在于非淋巴组织和脾脏的边缘区，在稳态和感染条件下均可负载抗原迁移至淋巴结的T细胞区。cDCs具有识别组织损伤、摄取外源和内源抗原、处理和提呈吞噬抗原给T淋巴细胞的重要功能[5-6]。pDCs因其生物学形态类似于产生抗体的浆细胞而得名，是一群数量较少的DCs，主要分布在血液和淋巴组织中并能通过血液循环进入淋巴结。pDCs能够在识别病毒核苷酸后分泌大量的I型干扰素，与NK细胞、B细胞、髓系树突状细胞等多种免疫细胞相互作用并调控它们的功能，被认为是炎性反应的调控者以及先天免疫和适应性免疫之间的联系桥梁[7]。在炎症反应过程中，一类由单核细胞分化而来的DCs可被迅速募集到感染部位并提呈抗原给CD4 T细胞和CD8 T细胞，这类DC被称为moDCs。在感染情况下moDCs能够分泌大量的TNF-α和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)，从而抵抗病原感染[8-9]。
自DC发现至今，对于DCs发育和分化过程的研究不断深入，DCs的分化发育及功能除了受细胞外因素和细胞内遗传因素的影响外，也受到表观遗传学的调控。组蛋白修饰是表观遗传修饰的重要机制之一，主要包括组蛋白的甲基化与去甲基化，乙酰化与去乙酰化，组蛋白的磷酸化，泛素化及二磷酸腺苷核糖基化[10]。根据现有研究，组蛋白的乙酰化和甲基化对于基因表达调控的作用尤为关键。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：利用细胞生物学、免疫学和生物化学的实验方法研究表观遗传学中组蛋白去乙酰化在树突状细胞发育和功能中的调控作用
研究内容：以DC体外培养体系为基础，利用定量PCR测定组蛋白去乙酰化酶家族各基因的相对表达量筛选可能影响DC发育的目的基因，根据筛选出的目的基因获得基因敲除小鼠模型，流式细胞分选获得DC，用LPS刺激性培养后ELISA测定其分泌的细胞因子，探寻组蛋白去乙酰化酶在DC发育与功能中的调控作用。
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1．小鼠脾脏DC亚群的获取
稳态DC亚群来源于C57BL/6小鼠脾脏。大体步骤：打开小鼠左侧腹腔取出脾脏，剪碎，消化。将消化后的脾脏进行裂解红细胞处理后，在ρ1.077的Nycodenz中进行密度离心。随后通过抗体低温孵育与免疫磁珠负选去除杂细胞并对目的细胞进行富集，用连接不同荧光素的表面分子抗体和细胞共同孵育，最后用流式分选仪进行细胞分选。脾脏DC亚群： CD8 cDC（CD45RA-CD11c CD8α CD172a-），CD8-cDC（CD45RA- CD11c CD8α-CD172a ）
4. 研究创新点
目前，表观遗传调控在免疫细胞发育和功能中发挥的作用正受到广泛关注，对于DC来说，表观遗传的研究刚起步，目前已有非编码RNA调控其分化发育的研究报道，但仍没有以组蛋白修饰调控为核心的标志性报道。
5. 研究计划与进展
研究计划：
2014.2-2014.3筛选DC中相对高表达的组蛋白去乙酰化酶基因，引进目的基因floxed的小鼠，将其分别于带有诱导性启动子的Cre重组酶小鼠和带有DC特异性启动子的Cre重组酶小鼠杂交获得基因条件性敲除小鼠。
2014.4-2014.5根据敲除方法的不同将实验小鼠分为诱导性敲除实验组和DC特异性敲除实验组，分选得到各实验组的moDCs进行体外刺激试验，探讨目的基因对moDCs功能的调控。
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