大肠杆菌细胞周质分子伴侣的克隆与表达开题报告

 2023-02-15 10:15:10

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

蛋白质在细胞的各种生命活动中扮演了重要的角色,如信号传导、免疫应答、细胞粘附等。

20世纪70年代,DNA重组技术的应用,使蛋白质能在多种宿主细胞中表达[1]。

重组蛋白技术是研究蛋白质结构和功能的重要手段。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标克隆并表达大肠杆菌周质分子伴侣。

研究内容根据SurA、FkpA、RotA、DegP四种大肠杆菌细胞周质分子伴侣的序列设计引物,通过PCR方法扩增出基因,测序鉴定后插入到原核表达载体pET-28a中,转入BL21中诱导表达蛋白。

关键问题成功克隆出分子伴侣基因并能够在大肠杆菌中以可溶的形式表达。

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3. 研究的方法与方案

研究方法实验室PCR方法体外扩增分子伴侣,与载体结合后转导进入感受态细胞,在细胞内进行大量增殖。

提取质粒验证所扩增的目的基因序列正确。

然后将目的基因进行酶切构建表达载体,再转导进感受态细胞,诱导表达,检测表达的蛋白,以此鉴定分子伴侣是否成功克隆。

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4. 研究创新点

目前国内外研究较多的是大肠杆菌细胞质分子伴侣,而大肠杆菌细胞周质分子伴侣的研究较少,本课题所研究的SurA、FkpA、RotA、DegP分子伴侣未曾有过类似的研究。

5. 研究计划与进展

研究计划2016.12-2017.01:提取目的基因,PCR扩增,连接T载,转导进感受态细胞。

提取质粒,重组质粒鉴定。

2017.02:质粒测序结果正确,则开始构建表达载体,转导进大肠杆菌,诱导表达。

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