1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起猪的一种急性,高度接触性病毒传染病，病猪死亡率接近 100%。其潜伏期为5-15天.临床症状以高热、病程短、高死亡率、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变为主要特征。该病被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病，2018年8月传入我国，并迅速扩散到全国。由于目前尚未有效的商品化疫苗，一旦发病只能扑杀。因此，对于该病流行病学的认识和诊断技术的研究具有十分重要的意义。
最初，OIE建议将病毒分离作为ASFV的金标准诊断技术，但是，病毒分离非常耗时且费力。因此当通过其他方法例如荧光抗体测试筛选ASF时，它通常用作参考实验室的确认性测试。免疫荧光法不适用于ASF爆发的早期和快速监测，因为直到感染后约14天才诱导抗体。目前分子诊断分析已得到广泛使用，例如聚合酶链反应和实时荧光定量PCR。PCR的技术具有特异性和敏感性，但需要特定的仪器和技术，所以需要一种快速，方便，现场的方法来检测ASF。
本课题利用p72基因的聚合酶链反应（PCR）与侧流试纸（LFS）相结合，用于ASFV的快速检测。
2. 研究的基本内容和问题
本课题试图开发一种新颖的PCR检测方法，与侧向流动条（PCR-LFS）结合使用，可用于ASFV的现场检测。
该测定法利用p72基因，使用设计的引物通过PCR将其扩增，并在5'末端用生物素和地高辛标记。
然后，在已附着金纳米颗粒的测试线上，链霉亲和素和抗地高辛单克隆抗体会识别出扩增产物。
3. 研究的方法与方案
1.标准质粒DNA制备
在大肠杆菌DH5a细胞中扩增pUC57-P72的质粒，并使用SanPrep质粒MiniPrep试剂盒（Sangon Biotech）提取和纯化。使用ND-1000分光光度计对质粒DNA进行定量，并调整至最佳浓度以用于后续实验作为模板和阳性对照。
4. 研究创新点
ASF是家猪和野猪中最严重的病毒性疾病之一，并且ASFV具有跨越边境和大洲传播的显着能力（Li等人，2018; Vergne等人，2017）。 ASF已对包括非洲，欧洲和俄罗斯联邦在内的许多地区的猪肉行业构成威胁（Wang等人，2019）。据报道，2018年6月在中国辽宁省沉阳市附近的一个农场爆发了中国首次爆发ASF（Zhou等人，2018）。之后，ASF在中国迅速传播，在许多省爆发（Li et al。，2018）。据世界动物卫生组织称，截至2019年6月12日，中国32个省份共报告了143例经实验室确认的ASFV感染的家猪或野猪病例（Ge等人，2018）。已经研究了多种基于抗原，DNA和病毒载体的ASFV疫苗策略，但没有一种是完全成功的（Wang等人，2019）。因此，建立快速，直接的现场诊断方法对疾病的预防和控制尤为重要。
OIE推荐的PCR测定法和实时PCR测定法是在无ASF国家中用于检测ASFV的主要实验室方法。但是，这些方法需要不能用于现场测试的专用仪器（Gao等人，2018）。引入和传播ASFV的重要途径是通过运输受感染的猪或受污染的猪肉产品。因此，急需要通过应用可在各种条件下使用的方法来检测ASFV。 PCR-LFS分析是一种新颖的核酸检测技术。与常
规和实时PCR分析相比，PCR-LFS优点是较低的设备依赖性和直观的结果确定。
规和实时PCR分析相比，PCR-LFS分析受益于较低的设备依赖性和直观的结果确定。5. 研究计划与进展
2020.2-2020.4：查找相关文献，学习相关试验技能，制定试验计划。
2020.4-2020.5：开展部分实验。
2020.5：整理数据，撰写毕业论文
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