1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
养禽业在我国国民经济中占据着相当重要的地位,近年来随着规模化养禽业的不断发展,新城疫、禽流感等禽病发生几率越来越大。造成这种情况的原因之一是因为饲养环境不佳,导致禽机体免疫功能下降,甚至疫苗免疫后也不能产生有效的保护,这给禽病的诊断和防治带来很大的困难。禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类传染病,鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽均可感染,发病情况差别较大,有的出现急性死亡,有的无症状带毒。高致病性禽流感不仅可对养殖业造成毁灭性打击,而且能够持续不断地跨种间传播感染人类,OIE将高致病性禽流感列为A类动物疫病,我国也将其列为一类动物疫病。当前,我们不仅要防御病毒,更重要的是提高家禽的自身免疫力。因此,寻找与开发动物体内具有提高机体免疫力的物质,从而对动物机体产生保护,不失为一种好方法。家禽的脾脏中有很多具有生理功能的物质,其中有许多物质在抵抗病毒感染方面具有重要作用。
脾脏小分子活性物质又叫转移因子,是从脾脏提取的一种可透析的小分子物质,其分子组成中含有甘氨酸和多种氨基酸。研究表明,该物质能将供体的免疫信息传递给受体,使受体获得特异性或非特异性的细胞免疫功能,提高机体的免疫应答能力,从而增强机体的免疫力,是一种良好的免疫增强剂。在使用疫苗的同时,加入免疫增强剂以提高集体的免疫力,不失为一种良好的方法。而且转移因子的制备原料来源广泛,简单易得,作为一种新型的免疫增强剂,具有良好的应用潜力和研究价值。
转移因子在机体中作用时间快,用量小,产生免疫力强。一方面它分子量小,完全不具抗原性,应用后不刺激机体产生抗体,因为不会被抗体消灭;另一方面它本身可以传递免疫信息,激活淋巴细胞,能够在一定幅度内提高禽流感病毒抗体水平,延长抗体在机体内的保持时间。目前,国内外对脾脏转移因子的研究大多数还在试验阶段,但一些临床应用报道表明,我国已先后试制了猪、羊、马、牛等动物的转移因子,并且在临床上取得了一定的效果,研究表明,转移因子能够明显提高动物的免疫器官脏器指数,机体内的抗体水平,从而增强动物机体的免疫力。而且,转移因子的制备原料来源广泛,简单易得,作为一种新型的免疫增强剂,具有良好的应用潜力和研究价值。如何制备和利用高效特异的动物转移因子,用于防治畜禽的重要疫病,是我们今后要研究的一个重要方向。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:
1、研究家禽脾脏小分子提取物的组成成分以及作用机理
2、研究家禽脾脏小分子提取物与禽流感疫苗联合免疫小鼠与禽流感疫苗单独免疫小鼠对小鼠免疫机能的影响
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析
研究方法:
超声波提取法:利用超声波的高频振荡所产生的空化作用、机械作用和热学作用, 在物体内部形成局部高温、高压的环境,增加分子运动的频率和速率。这些作用会使动物细胞组织变形、破裂、从而释放出内容物,促进了细胞内有效成分的溶出。另外,超声波在传播过程中其能量不断被溶剂分子吸收转成热能,可加速有效成分的溶出。
4. 研究创新点
5. 研究计划与进展
研究计划
用超声波法提取家禽的脾脏小分子混合物,作为佐剂,与禽流感灭活疫苗混合,制成联合疫苗。取小鼠40只,随机分为4组,10只/组。饲养至14日龄时进行疫苗免疫:第1组注射无菌PBS,0.2ml/只;第2组只注射家禽脾脏小分子,0.2ml/只;第3组只注射禽流感灭活疫苗,0.2ml/只;第4组注射添加有脾脏小分子物质的禽流感灭活疫苗,0.2ml/只。在免疫后7、14、21、28、35天采集翅静脉血,检测小鼠的抗体、T细胞亚型及淋巴细胞活力。研究脾脏小分子混合物对家禽免疫力的影响。
预期进展
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