1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、 课题的意义湖羊是我国一级保护地方畜禽品种，为稀有白色羔皮羊品种，具有早熟、四季发情、一年二胎、每胎多羔、泌乳性能好、生长发育快、改良后有理想产肉性能、耐高温高湿等优良性状，分布于我国太湖地区，终年舍饲的绵羊品种。
近年来， lncRNA 在精子发生过程中的作用逐渐被挖掘。
精子发生主要分为有丝分裂、减数分裂和精子形成三个阶段，这些过程被阶段性特异的基因表达严格调控，众多的调控性 lncRNAs 则是基因表达的重要调控因子。
2. 研究的基本内容和问题
一、 研究目标探讨 LncRNA TCONS00863147 和靶基因 PRKCD 在绵羊睾丸发育过程中的表达水平变化规律及其在绵羊睾丸间质细胞中的作用，为提高公羊的繁殖能力提供理论依据二、 研究内容本试验选取不同生长发育阶段（5 日龄、3 月龄、6 月龄、9 月龄、2 周岁）的湖羊公羊 15 只（每组 3 只）作为实验动物，在实验室前期高通量测序和生物信息学筛选的基础上，从体内和体外两方面验证，揭示 LncRNA TCONS-00863147 及靶基因 PRKCD 之间的靶向关系，进而探究其在湖羊睾丸发育中的作用机制，具体内容如下：（1）利用生物信息学分析 LncRNA TCONS_00863147 及 PRKCD 基因的靶向关系；（2）利用荧光定量 PCR 技术分析 LncRNA TCONS_00863147 及靶基因 PRKCD 在湖羊组织中的表达情况及在睾丸不同发育阶段的表达变化模式；（3）利用睾丸间质细胞验证 LncRNA TCONS_00863147 与其靶基因 PRKCD 的调控关系。
三、 拟解决的关键问题(1) LncRNA TCONS-00863147 和 PRKCD 的靶向调控关系；(2) LncRNA TCONS-00863147 和 PRKCD 在湖羊睾丸发育中的作用。
3. 研究的方法与方案
一、 研究方法1. 生物信息学分析2. 实时荧光定量 PCR3. 细胞培养4. siRNA 干扰和细胞转染技术二、 技术路线 三、实验方案1. 生物信息学分析根据前期湖羊睾丸 lncRNA 高通量测序结果，对 LncRNA TCONS_00863147 和PRKCD 的基因组信息进行分析。
2. 组织水平检测2.1 获取组织屠宰湖羊，取心脏、肝脏、肾脏、十二指肠、空肠、回肠、附睾头、附睾体、附睾尾、睾丸等组织，置于含有 RNAlater 的冻存管中，并在液氮快速冷冻，置于 -80 ℃保存备用。
2.2 各组织总 RNA 的提取(1) 从 RNAlater 中取出组织，称取各个组织的重量大小约 0.1 g，置于 2 mL 的EP管中，加入 1 mL 的 Trizol 试剂匀浆，颠倒混匀，4 ℃静止 10 min 。
4. 研究创新点
系统分析了睾丸发育各阶段 LncRNA TCONS-00863147 和 PRKCD 表达的动态变化，探究了其在睾丸发育中的作用。
5. 研究计划与进展
1. 2017 年 07 月：实验技术学习；2. 2017 年 08 月- 2017 年 10 月：饲养及采集样本；3. 2017 年 11 月- 2018 年 02 月：试验样品的采集和处理；4. 2018 年 03 月- 2018 年 05 月：试验样本的分析测定，实验数据的整理和结果的分析，毕业论文撰写；5. 2018 年 06 月：总结验收（1）研究 LncRNA TCONS-00863147 和 PRKCD 在睾丸中的表达变化，分析这种变化对睾丸发育的影响；（2）提交毕业论文一份。
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