团头鲂Sirituin1基因克隆及组织表达分析开题报告

 2023-02-16 09:19:25

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,Sir2)相关酶类,是一种高度保守的 NAD 依赖的蛋白去乙酰化酶类。

Sir2在基因沉默、基因组稳定性、细胞寿命以及代谢调节上具有必不可少的作用。

Ivy等率先从酵母中分离并鉴定出Sir2基因[1]。

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2. 研究的基本内容和问题

目标:克隆团头鲂Sirtuin1(Sirt1)基因,并对其进行组织表达分析。

内容:从中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南泉基地提供的鱼体健康,体表无伤痕,形态正常、无畸形,游动能力强的团头鲂中选取不同规格共计18条,取鳃、脑、肌肉、肝脏、脾脏、肾、头肾、心、肠等9种组织并置于-80℃冰箱备用,采用RNAiso Plus试剂盒法提取其总RNA,组织各0.05 ~ 0.1 g,用生理盐水冲洗后加入1mL RNAiso Plus( TaKaRa,Japan),立即用高通量组织破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司) 充分匀浆后使用,RNA的提取按照试剂的操作说明进行。

采用RT-PCR方法扩增和克隆团头鲂Sirt1基因并对其组织表达进行分析,RT-PCR中使用SYBR PrimeScriptTM一步法RT-PCR试剂盒对提取到的总RNA进行处理,对RNA序列进行分析,推导出其他结论。

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3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法:从中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南泉基地提供的鱼体健康,体表无伤痕,形态正常、无畸形,游动能力强的团头鲂中选取不同规格共计18条,取鳃、脑、肌肉、肝脏、脾脏、肾、头肾、心、肠等9种组织并置于-80℃冰箱备用,采用RNAiso Plus试剂盒法提取其总RNA,组织各0.05 ~ 0.1 g,用生理盐水冲洗后加入1mL RNAiso Plus( TaKaRa,Japan),立即用高通量组织破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司) 充分匀浆后使用,RNA的提取按照试剂的操作说明进行。

采用RT-PCR方法扩增和克隆团头鲂Sirt1基因并对其组织表达进行分析,RT-PCR中使用SYBR PrimeScriptTM一步法RT-PCR试剂盒对提取到的总RNA进行处理,对RNA序列进行分析,推导出其他结论。

技术路线:对样本进行处理并开始实验,对各组织的RNA的提取与检测---测定提取RNA的纯度---引物设计与合成---实时荧光定量PCR---生物信息学分析,得出其他结论实验方案及可行性分析:1. 选取样本,采集组织并利用试剂盒法提取各组织总RNA,获得纯度合格的总RNA2. 设计引物,进行实时荧光定量PCR3. 进行生物信息学分析,得出其他结论项目整体方法可靠,可行度高。

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4. 研究创新点

选择国内外研究相对较少的团头鲂SIRT1作为研究主体,项目新颖。

5. 研究计划与进展

2017年10月~12月实验用团头鲂的饲养、采集与取样2018年1月~2月各组织总RNA的提取以及提取总RNA纯度的检测2018年2月~3月实时荧光定量PCR2018年3月~4月生物信息学分析,获得研究成果2018年4月~5月准备结题工作,根据研究成果,撰写毕业论文

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