HDAC3在小鼠卵母细胞成熟中的作用开题报告

 2023-02-16 09:19:29

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

一、 本课题的意义卵母细胞发育是雌性生殖过程的重要环节之一。

在人类,卵母细胞质量低下会导致女性不孕不育、自发流产及出生缺陷等重大生殖疾病。

在农业领域,卵母细胞的质量也与多精受精及胚胎发育潜能等直接相关,决定了动物繁殖率的高低及由此而产生的畜牧业经济效益。

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2. 研究的基本内容和问题

一、 研究的目标1、用HDAC3特异siRNA(small interfering RNA)抑制其HDAC3水平,观察抑制HDAC3后小鼠卵母细胞减数分裂进程的变化。

2、利用免疫荧光染色等技术观察实验组卵母细胞减数分裂成熟进程的影响,及对减数分裂成熟装置(如染色体、纺锤体等)的影响,进而探讨HDAC3在小鼠卵母细胞成熟中的作用。

二、 研究的内容通过免疫荧光染色和激光共聚焦扫描显微镜检查HDAC3在小鼠卵母细胞不同阶段的分布,利用HDAC3特异siRNA抑制其HDAC3水平,观察其对小鼠卵母细胞体外成熟过程的影响,包括对GVBD及极体排出的影响,对减数分裂过程中纺锤体和染色体的影响。

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3. 研究的方法与方案

一、 研究方法1、取6-8周发育完全的小鼠GV期卵母细胞,在培养液中培养0h(GV期)、3h(GVBD)、7h(MI)、9h(AI-TI)、14h(MII),观察HDAC3在小鼠卵母细胞发育过程中的定位。

2 、取6-8周发育完全的小鼠GV期卵母细胞,体外敲低HDAC3蛋白,在培养液中培养3h,统计GVBD率,培养14h,统计第一极体排出率,观察卵母细胞成熟状况。

3 、取6-8周发育完全的小鼠GV期卵母细胞,体外敲低HDAC3蛋白,在培养液中培养14h,通过免疫荧光染色观察纺锤体染色体是否异常。

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4. 研究创新点

HDAC3是一种普遍存在的蛋白,但是人们对于其在卵母细胞成熟过程中的作用却一无所知。

本课题从组蛋白乙酰化修饰方面,首次通过HDAC3在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用,探讨卵母细胞的减数分裂调控机制。

5. 研究计划与进展

2017年9月至2017年12月:熟练掌握小鼠卵母细胞的采集以及体外成熟培养,免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜的使用等操作技术。

2018年3月至2018年5月:完成全部主体实验。

2018年4月至2018年5月:本科生毕业论文撰写,并准备答辩等相关事宜。

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