1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义:α-乳白蛋白(alpha-lactalbumin, α-LA)是乳清蛋白中的一种钙结合蛋白,有独立和复合两种存在形式,对其蛋白晶体结构分析发现有许多变种。
大部分该蛋白有123个氨基酸残基构成,最主要的作用为调节乳糖的合成,间接提高动物乳汁含量。
人α-LA富含人体所必须的各种氨基酸,能够促进新生儿大脑发育提高胎儿免疫力;更有研究表明,α-LA能够诱导肿瘤细胞凋亡。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:应用PCR技术对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点和拷贝数进行检测从而确认转基因的结果。
研究内容:1、应用巢式PCR对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点进行检测。
2、应用Real-time PCR对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白拷贝数进行检测拟解决的问题:确定转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点和拷贝数。
3. 研究的方法与方案
研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标:应用PCR技术对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点和拷贝数进行检测从而确认转基因的结果。
研究内容:1、应用巢式PCR对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点进行检测。
2、应用Real-time PCR对前期得到的转基因奶山羊中人α-乳白蛋白拷贝数进行检测拟解决的问题:确定转基因奶山羊中人α-乳白蛋白整合位点和拷贝数。
4. 研究创新点
1、采用随机整合载体制备的转基因羊外源基因的整合位点是随机的、未知的,需要通过PCR或者全基因组测序技术来确定。
整合位点对外源基因的稳定、高表达以及转基因动物的安全性都有很大的影响。
2、采用随机整合载体制备的转基因羊外源基因的拷贝数是未知的,需要通过realtime-PCR或者全基因组测序技术来确定。
5. 研究计划与进展
2017年11月初--2018年1月初:进行DNA提取和PCR技术的学习2018年3月初--2018年4月末:完成该实验,得出实验结果2018年5月初:对实验结果进行统计,分析实验中存在的问题,得出实验结论,撰写论文
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