1. 研究目的与意义
内容：1.薯蓣皂苷系列脱糖基代谢物的制备与纯化2.建立同时测定生物样品中薯蓣皂苷及其脱糖基代谢产物LC-MS/MS分析方法3.薯蓣皂苷及其脱糖基代谢物在大鼠体内的药代动力学、尿粪排泄研究意义： 目前国内研究的主要是薯蓣皂苷（dioscin）及其苷元(diosgenin)的药动学，检测的方法也大多使用反相高效液相法，本课题除上述两种物质外，增加了polyphyllin Ⅴ、trillin、progenin Ⅱ三种脱糖基代谢产物，检测方法采用的是液质联用，对大鼠体内代谢产物的检测灵敏度更高，此外国内普遍认为薯蓣皂苷的药效主要来自于薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元，本课题意在探究薯蓣皂苷体内脱糖基代谢产物是否也有药效，希望能够确定薯蓣皂苷发挥药效的确切物质基础。
2. 文献综述
内容：1.薯蓣皂苷系列脱糖基代谢物的制备与纯化2.建立同时测定生物样品中薯蓣皂苷及其脱糖基代谢产物LC-MS/MS分析方法3.薯蓣皂苷及其脱糖基代谢物在大鼠体内的药代动力学、尿粪排泄研究意义： 目前国内研究的主要是薯蓣皂苷（dioscin）及其苷元(diosgenin)的药动学，检测的方法也大多使用反相高效液相法，本课题除上述两种物质外，增加了polyphyllin Ⅴ、trillin、progenin Ⅱ三种脱糖基代谢产物，检测方法采用的是液质联用，对大鼠体内代谢产物的检测灵敏度更高，此外国内普遍认为薯蓣皂苷的药效主要来自于薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元，本课题意在探究薯蓣皂苷体内脱糖基代谢产物是否也有药效，希望能够确定薯蓣皂苷发挥药效的确切物质基础。
3. 设计方案和技术路线
1、由于缺少五种代谢产物中progenin Ⅱ的对照品，故需制备： （1）取2ml dioscin(1.01mg/ml)甲醇溶液 18ml盐酸甲醇溶液（pH=1）→37度温孵4h→用氢氧化钠甲醇溶液中和至中性挥干，加甲醇复溶→10000r/min，10min后取上清液→进制备柱（0~3min为乙腈：水=60:40、3~10min为80:20、10~12min为95:5、12~20min为95:5、20~22为60:40、22~26min为60:40）→收集16~22min（progenin Ⅱ）的制备液； （2）将制备液挥干并且用甲醇复溶，涡旋离心取上清液备用→制备柱等度洗脱（乙腈：水=70:30）得分离样品→挥干，复溶，离心取上清液→用polyphyllin Ⅴ对照品定量后稀释成约10微克/ml后用质谱确定是否为所需制备的progenin Ⅱ。
2、考察薯蓣皂苷标准品在pH=1的人工胃液中的水解变化： （1）配制五种物质的标准溶液，取C18柱尝试建立一个同时测量五种物质的HPLC含量测定方法； （2）通过上述方法和标准溶液得到五种物质分别的标准曲线； （3）取1ml dioscin(1.01mg/ml)甲醇溶液 9ml盐酸甲醇溶液（pH=1）37度摇床温孵8小时，分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h时间点取出400微升用氢氧化钠甲醇溶液中和至中性，然后挥干用100微升甲醇复溶，涡旋，离心取上清液80微升备用，平行2份； （4）进HPLC定量，得出变化曲线。
3、考察薯蓣皂苷及其脱糖基代谢产物大鼠体内药动学研究： （1）进行预实验，取两只大鼠（禁食12h）各取4.5mg/ml的dioscin的CMC-Na溶液2ml灌胃，收集血浆：10min、30min、60min、90min、2h、4h、8h于肝素EP管中离心取上清液100微升，收集尿液和粪便：0~6h、6~12h、12~24h、24~48h，尿液测体积、粪便称重； （2）取wistar大鼠称重（n=6，其中一组为空白对照）,禁食过夜，实验期间自由饮水，后各取4.5mg/ml的dioscin的CMC-Na溶液(45mg/kg)灌胃，于给药后2、4、8、12,、24、36、48、72、96、120h经大鼠眼球后静脉丛采集静脉血约0.2ml于肝素EP管中，离心，分离血浆，-20度冷冻保存； （3）取wistar大鼠三只置于代谢笼中，实验前禁食12h，自由饮水，以薯蓣皂苷90mg/kg的剂量灌胃给药（给药体积为10ml/kg），分别收集给药前及给药后0-6、6-12、12-24、24-36、36-48、48-60、60-72、72-96、96-108和108-120h各时间段的尿样，收集给药后0-24、24-48、48-72、72-96和96-120h各时间段的粪样，尿液记录体积，粪样称重，-20度冷冻保存； （4）取各标准品，制备混合溶液，进液质联用确定分析方法； （5）取空白血浆40微升，加入薯蓣皂苷及其四种脱糖基代谢产物的对照品混合溶液20微升，配制相当于大鼠血液浓度为1，2，4，10，20，40，80和100ng/ml的血浆样品，加入内标溶液20微升（800ng/ml人参皂苷Rh2甲醇溶液），乙腈100微升，涡流30sec，离心（4000rpm）10min，取上清液20微升进样，建立标准曲线。
4. 工作计划
2022年1月至2月：查阅相关文献，制定实验方案、制备progenin Ⅱ的对照品、考察薯蓣皂苷标准品在pH=1的人工胃液中的水解变化以及熟悉液质联用的使用方法；2022年2月至5月：考察薯蓣皂苷及其脱糖基代谢产物大鼠体内药动学研究2022年5月至6月：数据处理，撰写毕业论文
5. 难点与创新点
1、不仅仅考察了薯蓣皂苷及其苷元在大鼠体内代谢的药动学参数，而且针对另外3种代谢中间产物（polyphyllin Ⅴ、trillin、progenin Ⅱ）进行了研究；2、采用LC-MS/MS同时测定五种物质在大鼠血浆和尿粪中的含量。
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