1. 研究目的与意义
为了减少临床服用量,将六味地黄胶囊改成浓缩型胶囊，采用正交设计、平行试验法, 以成分含量、出膏率为指标,优化药物提取等工艺参数，解决中药材中有效成分不够和不能精炼的问题。并依据中国药典中规定的检测方法进行含量测定，以数据确保六味地黄胶囊的生产工艺合理，保证六味地黄胶囊的质量合格，从而保障人们群众的用药安全。
2. 文献综述
六味地黄胶囊的工艺研究
李扬 南京中医药大学
【内容摘要】目的：探讨六味地黄胶囊制作工艺是否稳定可行。方法：采用正交设计、平行试验法, 以成分含量及出膏率作为指标,优化药物提取等工艺参数。结果：六味地黄胶囊的制备工艺为:部分茯苓粉成细粉山茱萸乙醇回流提取,牡丹皮水蒸气蒸馏制备丹皮酚,两味药的药渣和剩余茯苓与熟地黄、山药、泽泻水煎提取,浓缩,混合干燥，粉碎,装胶囊,即得。并依据中国药典中规定的检测方法进行含量测定。结论：本工艺是稳定可行的。
【关键词】正交设计；生产工艺；质量检测
1.六味地黄复方：
六味地黄复方为滋阴补肾的经典代表方剂，自创方以来经历代医家临床应用效果显著，广泛用于治疗肝肾阴虚、腰膝酸软、头晕耳鸣、骨蒸潮热、盗汗、消渴、遗精等疾病[1]。
1.1 六味地黄复方的组成
六味地黄方由六种中药组成, 组方特点是: 三补三泻。补药有山药、熟地黄、山茱萸, 泻药则包括茯苓、泽泻、牡丹皮。其中熟地黄是六味地黄中的君药, 滋阴补肾是其主要功能; 山茱萸和山药同为臣药，其中山茱萸辅以养肝养肾, 山药补益开胃;又配茯苓淡渗脾湿以助山药之益脾; 泽泻清泄肾火, 并防熟地之滋腻;牡丹皮清肝肾之虚火, 并制山萸肉之温[2]。
1.2 六味地黄复方的剂型
六味地黄方配伍用药严谨, 是中药通补开合的经典名方。在现代社会被广泛应用于各种疾病，其制剂种类众多，制备工艺也各不相同，现有水提物、大孔树脂、全粉制剂、水提醇沉，纳米制剂、超临界技术制备微粉等[3]，此外，文献[4]报道中还提到六味地黄微丸、泡腾片、冻干粉、咀嚼剂等。而传统的丸剂服用量太大，临床应用不方便，为此决定根据处方中药味的现代研究资料, 对大多数中药进行提取, 将原制剂改成浓缩型六味地黄胶囊，并进行了制备工艺研究[5]。
2.工艺改进：
2.1茯苓：
茯苓含多糖类成分[6]，药材折断后有一定的颗粒性,粉碎后有很好的粉性，有良好的抗吸潮作用,故选择(部分)茯苓粉碎成细粉,作为辅料。称重并计算出粉率[7]。
2.2牡丹皮：
牡丹皮中的主要成分为丹皮酚，丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。故选用水蒸气蒸馏法，先用水蒸气蒸馏牡丹皮，与此同时，将备好的 1mol/L盐酸溶液加入收集的蒸馏液中，使蒸馏液结晶，结晶后过滤，结晶再用纯水洗涤，在低温下干燥，最后将牡丹皮结晶研成细粉[8]。
2.3山茱萸的提取
根据山茱萸主要有效成分熊果酸的理化性质，选择乙醇回流法，把握酒精浓度、回流时间、回流次数、酒精用量4个主要因素，采用正交试验方法，以熊果酸(薄层扫描法测定)和出膏率为指标，对提取进行优化[9]。
2.4其余药材的水煎工艺
影响煎煮的因素有加水量、煎煮时间、煎煮次数.煎煮温度、粒度大小、容器性质、浸泡时间等。设计正交试验，以出膏率为指标，优化加水量、煎煮时间、煎煮温度和煎煮次数[10]。
加水量 | 煎煮时间（h） | 煎煮温度（℃） | 煎煮次数 | |
1 | 10倍 | 1 | 80 | 1次 |
2 | 8倍 | 1.5 | 90 | 2次 |
3 | 6倍 | 2 | 微沸 | 3次 |
3.制备工艺
备齐以上六味原料药，先精密称取原料药茯苓 110g，用粉碎机粉碎成细粉，再将剩余的茯苓加水煎煮，共计三次，每次煎煮 30 分钟，最后过滤，将滤液合并，浓缩，直至茯苓滤液呈稠膏状；之后对山茱萸进行处理，具体方法是用乙醇回流提取，每次 1 小时，共计 2 次，过滤，将山茱萸药渣保存，备用，随后，再对山茱萸滤液进行回收乙醇处理的操作，浓缩，直至山茱萸滤液呈现稠膏状；在处理牡丹皮的时候，先用水蒸气蒸馏牡丹皮，与此同时，将备好的 1mol/L盐酸溶液加入收集的蒸馏液中，使蒸馏液结晶，结晶后过滤，结晶再用纯水洗涤，在低温下干燥，最后将牡丹皮结晶研磨成细粉；接下来将上一步的水溶液、山茱萸药渣、牡丹皮药渣和另三味原料药山药、熟地黄、泽泻一起加水并煎煮，每次 1小时，共计三次，煎煮完成后，过滤，将3次所得滤液合并，利用大孔吸附树脂柱，用 70%乙醇进行梯度洗脱，洗脱后，将洗脱液收集，再回收乙醇保存二次利用，随后，将洗脱液浓缩至稠膏状，加入制备好的山茱萸稠膏、茯苓稠膏和茯苓细粉，搅拌混合均匀，减压干燥后，粉碎成细粉，最后再在细粉中加入上述牡丹皮提取物细粉和适量辅料，混合均匀后，装入胶囊，制成 1000 粒，即可[规格（1）][11。
4.质量检测
4.1 牡丹皮色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水（70：30）为流动相；检测波长为 274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml含 20μg 的溶液，即得。供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取约0.2g，精密称定，置 50ml 量瓶中，加甲醇 40ml，超声处理（功率 250W，频率35k Hz） 20 分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于3.0mg。
4.2 酒萸肉：装量差异项下的本品内容物适量，研细，混匀，取细粉约0.6g[规格（1）]，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流 4 小时，乙醚液挥干，残渣加无水乙醇三氯甲烷（3：2）混合溶液适量，微热使溶解，定量转移至 5ml 量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法
(通则0502)实验，精密吸取供试品溶液 10μl，对照品溶液4μl 与 8μl，分别交叉点于同一硅胶 G 薄层板上，以环己烷三氯甲烷乙酸乙酯甲醇（25：15：5：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 110℃加热至斑点显色清晰，晾干，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（2010 年版药典一部附录Ⅵ B 薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：λs＝520nm，λR＝700nm。测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。
本品每粒含酒萸肉以熊果酸（C30H48O3）计，不得少于 0.60mg[11]。
总结：采用正交设计优选六味地黄胶囊的制备工艺，以成分含量、出膏率为指标,优化药物提取等工艺参数。通过检测结果的合格，有力的验证了六味地黄胶囊工艺的稳定性与可靠性，保证了六味地黄胶囊质量合格。
参考文献
[1]超长青，朱云龙.六味地黄丸（汤）的药理研究进展[J].中国医学报，1998,13（4）：63-64
[2]杨妙武. 对六昧地黄胶囊中泽泻提取工艺的研究 [D].南昌：南昌大学化学学院，2016，5: 5-6
[3]郭泉，胡容峰，高松，张利.六味地黄制剂的研究现状与中药制剂质量标准的构建[J].现代中药研究与实践2014,4:78-81
[4]任孝德，王艳艳.六味地黄制剂的剂型改进和质量控制方法研究进展[J].中医研究2004,4:61-62
[5]程强. 六味地黄胶囊制备工艺的研究 [J].陕西中医学院学报 , 2006 , 29 (4) :65-66
[6]汪显阳，姚春艳,张佩文.六味地黄丸中多糖含量测定研究[J].医药研究,2000,16(4):42-44.
[7]刘颖，王文晞，姜红.茯苓多糖的提取及其分子量测定[J].中国现代应用药学,2016,11:1402-1405
[8]王立,侯世祥,胡平等.牡丹皮药材的最适提取工艺研究[J]，2005，4：569-571
[9]吴闯.山茱萸提取工艺的实验研究[J]，2004,25（2）：49-50
[10]孙艳霞，何腾龙 . 正交试验法优选六味地黄微丸的制丸工艺 [J]. 制剂技术，2011，20(12) ：45.
[11]国家药典委员会.中国药典2015版（一部）.p707-708
3. 设计方案和技术路线
备齐熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、泽泻、茯苓六味药材：
1. 考虑加水量、煎煮时间、煎煮次数.煎煮温度、粒度大小、容器性质、浸泡时间等因素，正交优选熟地黄、山药、泽泻的提取工艺.
加水量 | 煎煮时间（h） | 煎煮温度（℃） | 煎煮次数 | |
1 | 10倍 | 1 | 80 | 1次 |
2 | 8倍 | 1.5 | 90 | 2次 |
3 | 6倍 | 2 | 微沸 | 3次 |
2. 其余药材的工艺路线
茯苓110g粉碎，加水煎煮3次每次30分钟 | 山茱萸：乙醇回流提取2次，每次1小时 | 牡丹皮蒸馏：水蒸气蒸馏，加1mol/L盐酸使结晶 |
过滤过滤、留渣过滤、留渣
浓缩至稠膏状 | 回收乙醇，浓缩至稠膏状 | （结晶）纯水洗涤，低温干燥、研磨成细粉 |
水溶液药渣药渣
加熟地黄、山药、泽泻
加水煎煮3次，每次1小时，过滤后合并滤液 |
大孔树脂吸附，70%乙醇洗脱 |
洗脱液浓缩
加入山茱萸稠膏、茯苓稠膏和细粉，减压干燥制细粉 |
加入牡丹皮提取物及辅料
制囊 |
质量检测 |
4. 工作计划
2022.03.01-2022.03.12 文献查找、撰写综述、确定实验方案
2022.03.26-2022.03.30 六味地黄胶囊的制备
2022.04.02-2022.04.06 成品胶囊的质量检测
5. 难点与创新点
采用正交设计优选六味地黄胶囊的制备工艺，以成分含量、出膏率为指标,优化药物提取等工艺参数，解决中药材中有效成分不够和不能精炼的问题。
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