1. 研究目的与意义
内容：利用已经建立的IDH1 R132H/C抑制剂在酶学水平的筛选方法考察P系列化合物的酶活抑制率，并对初步筛选出的P系列中酶活抑制率较高的化合物进行IC50的测定，以进一步筛选出有较高活性的IDH1 R132H/C抑制剂先导化合物。
意义：肿瘤细胞的能量和代谢异常是肿瘤细胞的十大特征之一。
近几年来，靶向肿瘤代谢酶的抑制剂的开发是一大研究热点。
2. 文献综述
IDH突变及其抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展卫诗蕙（南京中医药大学药学院，江苏 南京 210046）摘要：异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase，IDH）是胞质中重要的代谢酶，除催化异柠檬酸的氧化脱羧反应外，还可间接调节氨基酸和脂类代谢以及参与氧化应激反应。
与其他基因的突变不同，IDH突变后会将α-酮戊二酸（α-KG）转化为致瘤代谢物2-羟基戊二酸（2-HG）。
而在体内蓄积的2-HG可直接通过遗传表观调控、细胞信号转导、肿瘤微环境的变化等方式影响细胞的增殖与分化，从而促进肿瘤的发生发展。
3. 设计方案和技术路线
研究方案：1.查阅文献资料,了解IDH突变的特点、IDH突变与肿瘤发生发展的关系以及IDH突变抑制剂的研发现状；2.利用已经建立的酶学水平筛选模型，考察浓度为10 μM的化合物对IDH1 R132H和IDH1 R132C的酶活抑制作用，初步筛选出P系列中酶活抑制率较高的化合物；3.对初步筛选出的P系列中酶活抑制率较高的化合物进行IC50的测定，进一步筛选出具有较高活性的IDH1 R132H/C抑制剂先导化合物。
技术路线：1.单一浓度酶活抑制率的测定（初筛）突变型IDH能利用NADP 催化α-KG生成2-HG和NADPH，利用该反应原理，通过加入一定量的NADPH与突变型IDH酶发生反应后对剩余NADPH进行定量来反应酶活情况。
心肌黄酶能消耗NADPH将其底物刃天青转化成具有强荧光的卤灵素，该物质能在Ex/Em为544/590 nm的波长下被检测到荧光信号，且在底物一定的条件下，信号的强弱与NADPH的量正相关。
4. 工作计划
2022.1.102022.2.21查阅文献，了解IDH突变的特点、IDH突变与肿瘤发生发展的关系以及IDH突变抑制剂的研发现状。
2022.2.222022.3.9结合所查阅的文献，完成开题报告，购买试剂，做好实验准备。
2022.3.102022.5.13进行课题实验，做好实验记录。
5. 难点与创新点
1.先导化合物的发现不能只依赖虚拟筛选，酶学水平的筛选更显重要，是确证化合物酶活抑制作用最直接的手段之一。
本课题利用先前已经建立的酶学水平方法筛选出P系列中对IDH1 R132H/C有一定酶活抑制作用的化合物，以期成为IDH1变构抑制剂的候选化合物。
2.靶向IDH突变的小分子抑制剂有很好的开发前景，是开发靶向抗肿瘤药物的新靶点。
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