1. 研究目的与意义
中药动物药我国医药宝库的重要组成部分,是中药三大来源之一,其传统研究思路以中医理论为指导,重点研究临床应用等相关方面,主要包括:本草考证、资源调查、基源鉴定、动物药化学、加工炮制、药效研究、品质评价等。
动物药作为动物的器官、组织或代谢产物,其来源、组成、成分与植物药大相径庭,动物药研究是中药研究领域特有的分支,是具有独特体系的学科,因此采用目前相对较成熟的植物药研究思路去探索动物药的道路是很难走通的。
其中动物药的专属性鉴定方法研究起步较晚,目前主要的鉴定方法包括显微鉴别、薄层鉴别、氨基酸鉴别、DNA条形码鉴别、特征肽段鉴别等。
2. 文献综述
角类动物药特征肽段的寻找研究进展摘 要角类动物药作为一类较为名贵的中药材,特别是羚羊角更是价格奇高。
此类药材具有活性强、疗效显著、副作用小等特点,在中医药领域使用广泛。
但由于资源稀缺,且用药多为粉末,角磅丝等,难以通过外观鉴别,造成市场混乱、伪混品泛滥等情况。
3. 设计方案和技术路线
方案:含有丰富蛋白质类角类药材经过特异性生物酶(胰蛋白酶、LysC、GluC等)水解后,采用nano LC-MS/MS分析水解产物,分析鉴定水解产物中所有肽段的序列信息,通过数学集合理论,将不同批次的正品中所有肽段信息的交集(集合A)与不同批次的伪品中所有肽段信息的并集(集合B)进行相交,则集合B在集合A中的相对补集,即集合A中存在的肽段信息仅属于集合A而不属于集合B,这部分的肽段即为正品的可能的特异性肽段。
进一步通过肽段序列比对、LC-QQQ MS验证等方法,确定专属性肽段的准确性,从而寻找到专属性肽段。
该方法的样品中,正品、伪品的批次越多则越有利于寻找专属性肽段。
4. 工作计划
目前已经取样10批次水牛角,3批次山羊角,3批次猪蹄甲,完成基本提取工作,且完成胰蛋白酶切,脱盐待用。
5. 难点与创新点
此种方法在高通量质谱的基础上,规避统计学的分析方法,而采用数学集合的方法来寻找专属性肽段,构建正品的肽段集合与伪品的肽段集合,通过两者相交,取完全属于正品集合,同时完全不属于伪品集合的肽段作为专属性肽段的候选肽段,即回避概率性的分析,而采用全或无的分析思路寻找专属性肽段。
准确率高,重复性好。
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