鸡血藤药材的品质评价研究开题报告

1. 研究目的与意义

1.研究内容

通过定性分析及多元指标成分同时定量分析对鸡血藤药材进行品质评价研究。用超高效液相色谱/三重四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Triple TOF-MS/MS）法鉴定鸡血藤药材中的化学成分。用超高液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱（UPLC-QTRAP-MS/MS）法同时测定鸡血藤中黄酮类、蒽醌类等多元指标成分的含量，结合多元统计分析技术对不同产地及商品药材、不同部位的鸡血藤药材进行比较分析和评价，并考察鸡血藤药材中多元指标成分的动态积累变化及变化规律。

2.研究意义

2. 文献综述

鸡血藤质量品质评价综述

摘 要：本文对鸡血藤有关化学成分、含量测定及药理作用的文献进行了归纳和总结。鸡血藤化学成分主要包括黄酮类、蒽醌类、萜类、甾醇类以及其他成分，黄酮类成分是其主要成分，含量测定的研究方法主要为高效液相色谱法以及指纹图谱法等。药理作用主要包括抗肿瘤、抗血栓、抗病毒、改善造血系统及补血等作用。

关键词：鸡血藤；化学成分；含量测定；药理作用；品质评价

Surveys of ChemicalCompositions, Content Determination and Pharmacological Action of Spatholobus Suberectus

Abstract: This paper reviews the surveys of chemicalcompositions, content determination and pharmacological action of Spatholobus suberectus Dunn. The mainchemical composition of Spatholobussuberectus Dunn. is flavonoids, the mainingredient,tantalum,terpenes,sterol,and other compositions. The methods ofdetermination of the main compositions of spatholobus are high performanceliquid chromatography and fingerprint method etc. Pharmacological action mainlyinvolves antitumor activities,antithrombotic effects,antiviralactivities,improving blood system, blood enrichment effects.

Key words: Spatholobi caulis; Chemical compositions; Contentdetermination; Pharmacological action;Quality evaluation

鸡血藤为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn.的干燥藤茎，为《中华人民共和国药典》收载品种。秋、冬二季采收，除去枝叶，切片，晒干。鸡血藤性苦、甘，温，归肝、肾经；具活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效^[1]。可用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等。多产于两广地区、云南、福建、贵州等地，由于国内资源并不丰富，所以市场流通多从老挝、越南、柬埔寨、缅甸等东南亚国家进口，同名品种较多，诸如香花崖豆藤、红血藤、异型南五味子等，其功效不一，临床上不可混用。本文对近年来鸡血藤化学成分、含量测定及药理活性的研究情况进行了综述，以期为更好的开发利用鸡血藤药材提供科学的参考依据。

1.化学成分

鸡血藤最主要的成分为黄酮类，此外鸡血藤还含有丰富的蒽醌、萜类、甾醇类及其他多种成分。

1.1黄酮类

1.1.1异黄酮

表 1 鸡血藤中常见异黄酮类化合物

异黄酮类化合物主要包括芒柄花苷(ononin)、大豆苷元 (daidzein)、毛蕊异黄酮(calycosin)、染料木素^[2] (genistein)、芒柄花素(formononetin)、樱黄素(prunetin)、鸡蛋黄素(biochaninA)等。

巩婷^[3]等采用柱色谱方法分离化合物,采用谱学方法鉴定其结构，分离并鉴定了多种化合物，包括3'-甲氧基香豆雌酚（3-methoxycoumestrol,1），芒柄花素(formononetin,2)，染料木素(genisten,3)，8-甲雷杜辛(8-O-methylretusin,4)，7,3-二羟基-5-甲氧基异黄酮(5)，大黄酚(chrysophanol,6)，丁香脂素(syringaresinol,7),表木栓醇(epifriedelanol,8)，羽扇豆醇(lupeol,9)等。

1.1.2黄烷醇

常见黄烷醇类化合物包括没食子儿茶素^[4] (gallocatechin)、表没食子儿茶素(epigallocatechin)、儿茶素(catechin)、表儿茶素(epicatechin)等。

1.1.3黄酮类

包括柚皮素(narin-genin)等。

1.1.4二氢黄酮类

鸡血藤药材中常见二氢黄酮类化合物主要包括二氢槲皮素(Taxifolin)、甘草素(Liquiritigenin)、3,7-二羟基-6甲氧基二氢黄酮醇(3,7-dihydroxy-6-methoxy)、密花豆素(Suberectin)等。

1.1.5查耳酮类

鸡血藤药材中分离得到的查尔酮类化合物较少，如异甘草素(Isoliquiritigenin)等。异甘草素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗血小板聚集、心肌保护等广泛的药理学作用^[5]。

1.1.6花青素类

鸡血藤药材中含有的花青素类化合物较多，常用来作为鸡血藤质量控制的指示性成分。如原花青素B2 (Procyanidin B2)等。

1.1.7紫檀烷类

常见有高丽槐素(Maackiain)、美迪紫檀素(Medicarpin)等。

1.2蒽醌类

鸡血藤药材中也含有少量的蒽醌类化合物，如芦荟大黄素(aloe-emodin)、大黄素甲醚(emodin-3-methylether)、大黄酚(chrysophanol)、大黄素(emodin)、大黄酸(rhein)等。严启新等^[6]从密花豆藤茎中分离得到大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素。

1.3萜类：

如羽扇豆醇(lupeol)、羽扇豆酮(lupeone)等。

1.4甾醇类：

主要有β-谷甾醇^[2](β-sitosterol)、7-酮基-β-谷甾酮、胡萝卜苷^[5](daucosterol)等。

1.5其他类：

如原儿茶酸(protocatechuic acid)、焦性粘液酸(furoic acid)、间苯三酚(phloroglucinol)、琥珀酸^[2](succinic acid)、丁香酸^[5](syringic acid)、香草酸(vanillicacid)、二十五烷酸-α-单甘油酯(glycerol-α-pentacosanoate)、白桦脂酸(betulinic acid)、正二十六烷酸(hexacosanoicacid)等。

2.含量测定

陈乾平^[7]等认为黄酮类化合物是鸡血藤重要的活性成分，李斌^[8]等通过紫外-可见分光光度法对鸡血藤中的总黄酮进行含量测定，使用50%乙醇超声提取，实验得到结论，生长年限为2、3、5年的栽培鸡血藤的总黄酮含量低于野生鸡血藤，随着栽培年限的增加，鸡血藤总黄酮的含量有增加的趋势，但是栽培5年的鸡血藤总黄酮含量仍然不足野生鸡血藤总黄酮含量的一半。这提示我们在种植基地规范化的探索过程中，需要通过对空气、水分、土壤条件、温度等的控制，栽培出高品质的鸡血藤药材。

陈红英^[9]等以原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、芒柄花素等的峰面积以及整体峰形为评价指标, 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)建立鸡血藤指纹图谱，实验结果表明微波萃取提取效率最低，超声提取效率最高，又经实验发现，用体积分数100%甲醇提取时各个指标性成分含量较高，故确定以甲醇作为提取溶剂。经比较超声15、30、45min和萃取1、2、3次后的含量测定结果，以提取时间为30min、萃取次数为3次为最佳。

梁永枢^[10]等为测定鸡血藤药材中指标性成分染料木素和芒柄花素的含量，分别考察了提取方法（回流、超声、索氏）及提取溶剂（甲醇、乙醇、氯仿），结论认为以乙醇加热回流提取效果为佳；进而对不同浓度乙醇（30%，50%，70%，95%）、提取时间（15，30，45min）、溶剂量（30，50，70ml）及提取次数（1次，2次，3次）进行了考察，得到结论用70%乙醇50ml，回流提取2次，每次15min提取效果为佳。

黄灿辉^[11]等用HPLC法测定不同产地鸡血藤中原儿茶酸的含量，单纯从鸡血藤药材中提取分离原儿茶酸成分。

郑岩^[12]等曾探索同时测定3-羟基-9-甲氧基紫檀烷、芒柄花素和表儿茶素3个化合物的含量，认为表儿茶素因对热不稳定，难以采用回流方法制备，而采用室温超声提取时，3-羟基-9-甲氧基紫檀烷和芒柄花素由于结构中有甲氧基，提取效率极低，故撇除表儿茶素，建立了HPLC测定3-羟基-9-甲氧基紫檀烷和芒柄花素的方法。

杨冉冉^[13]等HPLC指纹图谱分析方法，运用聚类分析和主成分分析对鸡血藤指纹图谱进行模式识别研究。该实验对17批鸡血藤药材和4批鸡血藤混伪品进行分析，确定了35个共有峰，并根据对照品指认出6个共有峰。实验结果认为HPLC指纹图谱结合聚类分析、主成分分析可以快速、高效地评价不同产地鸡血藤药材的质量差异。

李莹^[14]等以儿茶素和表儿茶素的含量为指标，分别考察了甲醇-水和乙睛-水溶液、不同吸收波长下的色图谱比较，对比发现乙睛-水溶液分离效果和重复性较好，在280nm处鸡血藤中儿茶素和表儿茶素这两种儿茶素类成分响应值较好，干扰较少，因此最终选择选择乙睛-水溶液系统作为流动相，280nm作为测定波长。又采用超声法分别考察了水、甲醇、乙醇的提取效率对比，得到甲醇提取效率较高后，单独考察不同浓度的甲醇的提取效率，得到结果采用80%甲醇较为合适。

表2：鸡血藤的分析方法(Analytical Methods ofPanax Japonicum Saponin)

3.药理作用

鸡血藤具有改善造血系统、调节免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗贫血、抗血栓以及对酪氨酸酶双向调节等多方面的药理活性等作用。

3.1抗肿瘤

富琦^[17]等采用小鼠移植性Lewis肺癌模型，利用鸡血藤提取物SSCE进行体内抑瘤效应实验，探索其抗转移作用，并通过检测细胞周期及细胞凋亡情况探讨其抑瘤作用机制，实验结果低剂量SSCE对小鼠Lewis肺癌的抑制率最高，为28.6%，同时具有抗转移作用，作用细胞周期为G1期，凋亡率各组无显著性差异。

3.2抗血栓

王秀华^[18]等采用颈动-静脉旁路血栓形成实验，用测定血小板聚集率的方法研究鸡血藤水煎液的抗血栓作用，鸡血藤组血小板聚集率均明显降低，表明鸡血藤具有明显的抑制血小板聚集性作用。可显著降低血栓湿重，说明鸡血藤具有显著抗血栓形成作用，从理论上验证了鸡血藤活血化瘀的传统功效。

3.3抗病毒

曾凡力^[19]等利用鸡血藤药材60%醇提物经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后浓缩制得各不同极性溶剂萃取物，观察其药物毒性、病毒引起的细胞病变效应判断药物毒性及药物抗病毒效应，以此来研究鸡血藤醇提物及其不同极性溶剂萃取物的体外抗柯萨奇B3病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒以及乙型肝炎病毒的活性。实验得到结果鸡血藤醇提物无抗柯萨奇B3病毒和呼吸道合胞病毒活性，但具有抗甲型流感病毒、乙型肝炎病毒和单纯疱疹病毒Ⅰ型活性，且抗单纯疱疹病毒Ⅰ型效果显著。醇提物经初步萃取分离，得到5个不同极性溶剂萃取物，其中乙酸乙酯萃取物和水层留余物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型活性最显著，因此鸡血藤醇提物及其乙酸乙酯萃取物和水层留余物适用于抗单纯疱疹病毒Ⅰ型治疗药物的深入研究与开发。

3.4改善造血系统

邓家刚^[20]等利用环磷酰胺(CTX)、盐酸苯肼(PHH)、⁶⁰Co以及眼球后静脉丛放血等多种方式建立失血性小鼠血虚模型，结果表明鸡血藤总黄酮(Spatholobus suberectus total flavone;STF)对环磷酰胺(CTX)致小鼠白细胞(WBC）、骨髓有核细胞(BMNC)减少有明显提高作用，STF具有促进血虚模型动物造血功能恢复的作用，为STF的临床研究提供了实验依据。

3.5补血作用

张浩^[21]等利用多种不同方式建立不同机制的小鼠失血模型，以研究鸡血藤醇提物对血虚模型小鼠的补血作用。通过放血以复制小鼠失血性血虚模型，通过腹腔注射环磷酰胺以复制小鼠化学性血虚模型，和通过皮下注射乙酰苯肼同时控制饮食以复制小鼠综合血虚模型。实验结果以小鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT)计，结果认为鸡血藤醇提物对血虚模型小鼠有良好的补血作用，其机制可能与调节血液系统有关。

陈宜鸿^[22]等也曾以腹腔注射盐酸苯肼和用⁶⁰Co照射造模，形成小鼠骨髓抑制性贫血模型，得到结论鸡血藤可升高红血球、血红蛋白、红血球容积和红细胞分裂指数，并对早期红系祖细胞(BFU-E)和晚期造血红系祖细胞(CFU-E)的增殖有明显的刺激作用。但鸡血藤水煎剂浓缩物中成分复杂，兼具水溶性和脂溶性成分，其具体作用机制以及有效成分的研究，还有待深入。

4.品质评价

翟明^[23]首次建立了鸡血藤与其常见混淆品（大血藤、香花崖豆藤、鱼藤、常春油麻藤、厚果鸡血藤）的DNA指纹图谱，收集了10份正品鸡血藤野生及栽培种质、全国不同省市14份商品药材以及6种鸡血藤混淆品。

通过对鸡血藤药材性状特征的观察与描述对不同居群鸡血藤及商品鸡血藤药材的性状特征进行分析比较，其藤茎粗度和断面含树脂的偏心性环纹数及树脂色泽具明显差异。结果表明，不同居群鸡血藤及商品药材质量参次不齐。

通过HPLC法测定鸡血藤商品药材中原儿茶酸、儿茶素及表儿茶素的含量，其差异较明显，商品药材质量参次不齐。

李苗苗^[16]对20余个鸡血藤野生居群生态环境及种质资源进行了调查，对不同居群相同环纹数（3环）鸡血藤药材的总黄酮及五种指标性成分含量进行主成份分析并计算综合得分发现梅州梅县鸡血藤药材质量最优，惠州、韶关、广西产地鸡血藤质量次之，广州、深圳两地鸡血藤质量排名最后。对不同年份鸡血藤药材栽培品进行质量分析，结果表明：具有不同偏心性树脂环纹数的鸡血藤中醇溶性浸出物、总黄酮、儿茶素及表儿茶素的含量差异较大，且与树脂环纹数间没有一定变化规律；染料木素与芒柄花素含量在不同环纹数鸡血藤中的差异较小。该实验认为鸡血藤断面树脂环纹数的多少不能用于评价鸡血藤药材品质好坏的依据。

吕惠珍^[24]研究了不同产地和不同生长年限鸡血藤浸出物含量和灰分含量，以广西和越南产野生鸡血藤药材做浸出物含量、总灰分含量、酸不溶性灰分含量测定为切入点，研究发现随着鸡血藤生长年限的增加，浸出物含量增加，但是小枝条的含量低；栽培4年浸出物即能达到中国药典的标准；不同饮片类型浸出物含量也有所不同，薄片明显比厚片高。说明人工栽培鸡血藤切实可行，在加大对其鸡血藤植物资源保护的同时应加大人工栽培及繁育选育研究工作。

5.讨论

近年来，对鸡血藤的化学成分研究主要集中于黄酮类化合物上，而其他结构类型的化合物研究较少。传统认为鸡血藤药材韧皮部面积越大，颜色越深，药材质量越好，而有实验认为，木质部中有效成分含量多于韧皮部，我们对这个问题，不妨在多向考察药用植物学、栽培学、炮制学的基础上，再进行深入研究。

在质量控制标准的问题上，我们仍需结合临床药理作用、现代实验研究以加强标准，增加主要有效成分的质量标准检测，对药材生产过程中的每个环节都加以监控、测试，以完善从药材选育、栽培、采收到加工炮制等各个环节的质量检控指标，以提高药材质量、临床疗效。

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3. 设计方案和技术路线

4. 工作计划

5. 难点与创新点

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