1. 研究目的与意义
新生化颗粒是由当归、川芎、桃仁、炙甘草、干姜 、益母草、红花等中药组成的复方制剂。
具有活血祛淤、调经止痛 ,加强宫缩的作用。在临床应用多年，主治产后恶露不行,少腹疼痛 , 也可试用上节育环后引起的阴道流血,月经过多，防治药物流产后阴道出血，剖宫产术后出血。与传统的生化汤相比，新生化颗粒多了益母草，红花两味药材，疗效更加突出，临床上应用更为广泛。所查文献资料中新生化颗粒的质量标准研究多为阿魏酸含量的测定，部颁标准中对盐酸益母草碱和阿魏酸的标准有明确的规定，而该处方中还含有欧当归内酯A，苦杏仁苷，6-姜辣素，甘草苷，甘草酸铵等多种有效成分未有明确规定，为此该课题将测定新生化颗粒中其他成分的含量，提高其质量标准，有效控制该产品的质量。
笔者试图采取粉碎，超声，滤纸过滤，微孔滤膜过滤等技术提取新生化颗粒中的有效成分，通过高效液相色谱法测定当归，川芎中阿魏酸，欧当归内酯A，甘草中甘草苷，甘草酸铵等多种成分的含量，并得其线性关系，重现性，精密度和平均回收率，检测限等判定该方法是否准确可行。
2. 文献综述
新生化颗粒的主要成分及含量测定研究（综述）
邵佳蔚
( 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023)
摘 要：新生化颗粒是由当归、川芎、桃仁、炙甘草 、干姜 、益母草、红花等中药组成的复方制剂。具有活血祛淤、调经止痛 ,加强宫缩的作用。在临床应用多年，主治产后恶露不行,少腹疼痛 , 也可试用上节育环后引起的阴道流血,月经过多。本文综述了新生化颗粒中的阿魏酸，欧当归内酯A等多种成分含量测定的方法，完善新生化颗粒的质量标准。
关键词：新生化颗粒；主要成分；含量测定；研究进展
新生化颗粒是由当归、川芎、桃仁、炙甘草、干姜 、益母草、红花等中药组成的复方制剂［1］ 。具有活血祛淤、调经止痛 ,加强宫缩的作用。在临床应用多年，主治产后恶露不行,少腹疼痛 , 也可试用上节育环后引起的阴道流血,月经过多，防治药物流产后阴道出血，剖宫产术后出血。研究表明当归，川芎中的阿魏酸，欧当归内酯A，甘草中甘草苷，甘草酸铵为其主要有效成分。现研究进展有尚远宏等用反相高效液相色谱法测定颗粒中阿魏酸的含量 , 以期可有效地控制该产品的质量［2］；刘永生等采用高效液相色谱法测定方中当归、川芎中阿魏酸的含量［3］；倪小兰等报道用 HPLC 法测定抚芎和川芎中的阿魏酸和欧当归内酯A的含量［4］。
1．处方组成
当归240g，川芎90g，桃仁24g，炙甘草15g，干姜15g，益母草300g，红花15g，以上7味，粉碎成粗粉提取挥发油。蒸馏后的水溶液另器收集。药渣再加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述溶液合并，浓缩成稠膏，加入红糖适量，混匀，制成颗粒；于60℃烘干，粉碎，用乙醇制成颗粒，喷入挥发油，即得。 [5]制成新生化颗粒，6g/袋，相当于原材料9g。
2．主要成分的药理作用
2．1当归的药理作用研究进展
对血液及造血系统的影响：当归有较强的抗凝血和抗血栓作用，不同产地的当归存在差别。研究发现当归多糖及其硫酸酯可显著延长凝血时间、缩短出血时间;显著延长凝血酶时间和活化部分凝血活酶时间，其抗凝血作用主要是影响内源性凝血系统[6]。在研究当归多糖及其硫酸酯抗凝血作用的同时，发现其具有双向性调节作用,能升高低切全血粘度，增强红细胞的聚集性，促进血小板的聚集[6]。当归还有补血作用，可促进骨髓和脾细胞造血功能，显著增加血红蛋白和红细胞数。
2．2川芎的药理作用研究进展
川芎为中医常用的活血化瘀药,含有挥发油、生物碱、有机酸及多糖等成分。川芎及其化学部位、单体成分对心脑血管系统、神经系统、呼吸系统等多个系统具有改善血管内皮功能及冠状动脉血流量，降低血流阻力及血压,抗氧自由基、抗炎、抗癌、抗血小板聚集、抗血栓形成,保护神经等多方面的药理作用。
2．3甘草的药理作用研究进展
甘草具有肾上腺皮质激素样作用、抗消化性溃疡、解痉、抗炎及免疫抑制作用和解毒、抗病毒、镇咳祛痰、抗肿瘤、抑菌、防治肝损害、抗衰老、抗心律失常、抑制气道平滑肌细胞增生、降血脂与抗动脉粥样硬化等药理作用,其临床应用有广阔的前景。
2．4红花的药理作用研究进展
红花可以调经的，红花的成效与作用主要表现在补气血，通血气，活血通径、散瘀止痛。用于经闭、痛经、恶露不行、症瘕痞块、跌打损伤。红花药理作用广泛,对多种疾病均有较好治疗效果,尤其对冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑血栓、月经不调等疗效较好,还有食用、保健、美容的功能,极具开发潜能。
其中主要成分为当归，川芎中的阿魏酸，欧当归内酯A ；桃仁中的苦杏仁苷；甘草中的甘草苷，甘草酸铵；干姜中的6-姜辣素；益母草中的盐酸水苏碱，盐酸益母草碱；红花中的红花黄素A。
3．含量测定
3.1已知文献新生化颗粒含量测定研究进展
3.1.1新生化颗粒中阿魏酸的含量测定［3］
色谱条件：Betasil C18 色谱 柱(4. 6mm200 mm，5 m) ；甲 醇-0. 5%磷 酸 溶 液(50∶50)流动相；流速1.0mL/min，检测波长320nm，柱温25℃
溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含5μg的对照品溶液;取本品约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定质量，超声处理60min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取上清液即得供试品溶液。
3.2新生化颗粒中主要成分含量测定方法
3.2.1甘草中甘草苷，甘草酸铵的含量测定［1］
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长为237nm。
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0-8 | 19 | 81 |
8-35 | 19-50 | 81-50 |
35-36 | 50-100 | 50-0 |
36-40 | 100-19 | 0-81 |
溶液的制备：取甘草苷，甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇分别制成每1ml含甘草苷20μg，甘草酸铵0.2mg的溶液，即得。取本品粉末约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
3.2.2川芎中欧当归内酯A的含量测定[7]
色谱条件：RP-C18色谱柱(4．6mm250mm，5μm) ;流动相为乙腈－水，梯度洗脱:0～10min，40%～50%乙腈;10～30min，50%～80%乙腈;流速为1ml/min;检测波长为280nm;柱温为30℃;进样量为10μl
溶液的制备：称取欧当归内酯A对照品适量，精密称定于10ml量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，再精密量取上述溶液1ml至10ml 量瓶中，用无水甲醇稀释至刻度，即得浓度为0．1mg/ml的欧当归内酯A对照品溶液。精密称取川芎药材粉末( 过20目筛)2．000g，加入100ml 无水甲醇，精密称重，超声提取( 功率250W，频率59kHz)1h，冷却后称重，加溶剂补足重量，摇匀后静置，取上清液，通过0．45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液，备用。
3.2.3生姜中6-姜辣素的含量测定[8]
色谱条件：ODS柱( 250mm4.6 mm , 5μm) 流动相: 乙腈-甲醇-水( 43∶5∶52) 柱温 : 35 ℃,检测波长:280nm,流速:0.8mL/min。
溶液的制备：精密称取姜辣素对照品 2.68mg,以甲醇定容于10mL容量瓶,冰箱储存 , 备用。样品制备取生姜末1g ,精密称定,准确加入40 mL甲醇，回流提取40 min ，补足损失重量。吸取一定量，以0.4 5μm滤膜过滤,弃去初滤液 , 留取续滤液备用。
4结语
本综述中的方法为文献中可查阅到的已采用的方法，经研究总结后列举出来。但目前鲜有文献报道HPLC法同时测定新生化颗粒中阿魏酸和欧当归内酯A等多种成分含量的报道，为此上述课题有其特色创新和研究意义，并且HPLC法测定含量准确，简便。笔者会在接下来的课题实验期间对实验条件进一步完善和摸索，找寻最准确简便的实验条件。如实记录数据并将数据进行汇总和处理，完成多种成分的测定，为新生化颗粒质量评价提供新的方法。
参考文献：
[1]中国药典.一部［S］. 2010: 38，80，124.
[2]尚 远宏，刘 圆，石圣洪，周 猛，何妮蓉. 新生化颗粒的质量标准研究[ J] . 中成药 ，2007, 29( 3) : 393-396.
[3]刘永生，李晓坤，王金菊. 新生化颗粒的质量标准研究[ J] .中国实验方剂学杂志，2011,17(5):95-97
[4]倪小兰，何行真，单汝川.抚芎与川芎中阿魏酸及欧当归内酯A的含量比较［J］.江西中医学院学报，1998，10(4) :170 -171．
[5] 中华人民共和国卫生部药品标准[S].中药成方制剂 .第五册，1992. 194
[6] 杨铁虹,商 澎,梅其炳.当归多糖硫酸酯对凝血和血小板聚集的作用[J].中草药,2002,33(11):1010-1013
[7] 颜仁龙，郭璐，潘明凤，肖峰，周先礼. HPLC法测定川芎中藁本内酯和欧当归内酯A的含量[J].安徽农业科学，2012，40(26): 12857－12858
[8] 王维皓, 王智民, 徐丽珍, 杨世林. HPLC法测定生姜中有效成分6-姜辣素的含量[J].中国中药杂志，2002,27（5）：348-349
3. 设计方案和技术路线
研究方案：
采取粉碎，超声，过滤，微孔滤膜过滤等技术提取新生化颗粒中的有效成分，用HPLC法对其阿魏酸，甘草苷，甘草酸铵等有效成分进行含量测定，完善质量标准。
技术路线：新生化颗粒:1.粉碎，超声，过滤，微孔滤膜得滤
4. 工作计划
2022.1.5～2022.1.15 参观药检所，了解基本仪器的有关知识。
2022.1.15～2022.2.13 查阅相关资料，初步确定课题，设计方案。
2022.3.2～2022.3.10 开始课题实验，摸索高效液相色谱条件，撰写开题报告。
5. 难点与创新点
目前文献资料中新生化颗粒的质量标准研究多为阿魏酸含量的测定，关于用HPLC同时测定新生化颗粒中的阿魏酸和欧当归内酯A等多种成分的含量的研究鲜有报道，本课题采用HPLC法测定阿魏酸和甘草苷，甘草酸铵等多种成分的含量，完善新生化颗粒的质量标准。
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