1. 研究目的与意义
意义：
随着骨质疏松患者增加、症状又有加重的趋势，对骨质疏松的防治已成为一个世界性的重要卫生问题之一。本设计探讨淫羊藿苷对成骨细胞分化活性的影响，意在分子水平阐明其具体的作用机制。以期拓宽淫羊藿苷在骨代谢研究领域的研究，为临床上对骨质疏松的防治提供新思路。
内容：
2. 文献综述
淫羊藿苷对细胞代谢影响的研究进展
【摘要】：淫羊藿（Epimedium）是临床常用的补肾壮阳中药，淫羊藿苷（Icraiin，ICA）是淫羊藿中提取的总黄酮的一种主要活性成分，已有药理研究表明，淫羊藿苷对人体各种细胞代谢的过程存在不可忽视的影响。不论是最早研究的对生殖细胞的作用还是现在研究最多的对骨细胞、免疫细胞及癌细胞的作用，相较于西药及化学疗法，淫羊藿苷都更为安全有效。本文就淫羊藿苷多细胞代谢影响的研究进展做一综述。
【关键词】：淫羊藿苷；细胞代谢
3. 设计方案和技术路线
研究方案：
1、培养SaoS-2细胞，给予不同剂量淫羊藿苷（浓度选择0、0.1、10、100、1000nM）处理，进行24h、48h、72h细胞增殖试验。选取出不影响SaoS-2细胞增殖或凋亡的淫羊藿苷浓度范围，进行后续分化试验，以排除淫羊藿苷因促增殖引起的促成骨作用。
2、给予SaoS-2细胞不同剂量淫羊藿苷处理，同时进行成骨诱导培养（7d、14d、21d）收获细胞在蛋白和RNA水平检测成骨表型标记物Col1、OCN、BSP、ALP、Runx2的变化；检测ALP活性及其染色的变化；同时进行体外钙化试验，对细胞进行ARS和Von Kossa染色。
3、为研究淫羊藿苷对Wnt/β-catenin通路的影响，SaoS-2细胞单独或联合给予淫羊藿苷、氯化锂（Wnt通路激活剂）、DKK1（Wnt通路抑制剂），给药设计如下表格。在RNA或蛋白水平检测通路关键蛋白APC、AXIN、p-GSK3β/ GSK3β的变化，用WB/IF/Luc方法检测β-catenin的变化。
ICA | - |
| - |
| - |
LiCl（25nM） | - | - |
| - |
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Dkk1（50μM） | - | - | - |
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1、构建β-catenin稳定敲除的SaoS-2细胞株，同时进行淫羊藿苷药物干预，检测β-catenin敲除后淫羊藿苷对该细胞株的成骨活性影响，以及对Wnt通路信号分子的影响。
5、 统计学处理：
应用STATA10统计分析软件进行数据处理，所有数据均用均数标准差表示。统计分析均基于单因素方差分析，P值0.05具有统计学意义。
技术路线：
4. 工作计划
2022年02月，文献检索、完善课题设计。准备实验所需试剂及细胞的培养。
2022年03月，完成淫羊藿苷对成骨标记及分化表型的现象研究。
2022年04月，完成淫羊藿苷对Wnt通路信号的研究。
5. 难点与创新点
揭示淫羊藿苷对成骨细胞的作用，考察淫羊藿苷对成骨关键蛋白的作用；
首次从经典Wnt信号通路角度解释淫羊藿苷促成骨作用，解释淫羊藿苷的全新作用机制，为骨质疏松的药物治疗提供理论依据。
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