1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
| 1、研究意义 四物汤药方最早出现记载于《仙授理伤续断秘方》，组方为：熟地黄、当归、川芎、白芍，为主治血虚证之基础方，亦为补血调血法之代表方，目前应用较为广泛的药方则是取自《太平惠民和剂局方》的记载，将其用于妇科疾患的治疗。[1]根据文献，国内将四物汤在临床上用于妇科、内科、外科、儿科、五官科、骨伤科、喉科等，可用治产前腹痛、胎气不安、血崩、血虚发热、斑疮入目、传染性皮肤病、乳痈、便血、小儿痢疾、眼科疾患、白喉虚热、内伤瘀血、跌扑磕伤等。[2]国外文献报道，可将四物汤用于妇科病、动脉粥样硬化、肠道疾病以及慢性炎症等。[3]近年来，国内对于四物汤的研究主要集中于药理药效、配伍变化、作用成分以及临床应用等方面，对于四物汤的原药材质量的控制少有报道。 四物汤中的化学成分复杂多样，芍药苷是其中的活性成分之一，具有扩张血管、镇静镇痛、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。研究表明，中药在合煎过程中各种化学成分之间可能会发生一系列诸如水解、氧化、沉淀、加成、挥发和增溶等物理或化学反应，多种化学物质可能会形成相互之间的作用力，因此某些成分会通过与其他成分的相互作用而增加或降低溶解度。[4]如许益民[5]等通过研究当归承气汤中煎液中磷脂含量对总蒽醌的溶出影响，结果表明，随着当归用量的加大，煎液中磷脂成分含量的增加，总蒽醌溶出率也显著增大。这是因为磷脂具有乳化作用，可以增加其他物质在水中的溶解度。郭江玉[6]等通过高效液相色谱法测定四物汤合煎与单煎的4种化学成分的含量，结果表明，合煎液中的芍药苷、阿魏酸和藁本内酯的含量均高于单煎液，而洋川芎内酯Ⅰ则是低于合煎液低于单煎液中的含量。这说明4种化学成分之间存在某些成分的相互作用，从而影响了原药材的化学成分溶出率。 |
化学成分是中药发挥药效作用的物质基础，对于质量差和被提取过的中药饮片的化学成分含量也必将低于质量佳的饮片，如吕非非[7]等测定了40批川芎炮制品中阿魏酸和藁本内酯的含量，结果表明，饮片等级越高者，两种化学成分的含量越高，说明川芎的饮片等级与阿魏酸和藁本内酯的含量为正相关。袁一平[8]等经过测定A、B两类熟地黄饮片的化学成分发现，A类饮片的梓醇含量、毛蕊花糖苷含量和地黄苷A均较B类高出很多，表明熟地黄饮片的主要成分含量的高低可作为其等级划分的关键指标。当前，药品市场竞争异常激烈，中药饮片的质量直接影响到中医药的临床疗效和用药安全，因此对于中药饮片的质量控制显得尤为重要。《中国药典》规定，白芍饮片按干燥品计算，含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.2% 。[9]对于在质检抽查中含量未达到1.2%的白芍饮片将直接被列为不合格产品，但是中药材种植受其种源、种植环境、种植技术、种植管理、采收加工、仓储运输等多方面的影响，造成中药材质量参差不齐。[10] 那么，对于含量不达标的药材化学成分的溶出是否可以通过增加药材的用量来使其达到优质药材的药用效果，这一点值得我们去探索和研究。
| 四物汤是“治血”良药，市场需求量较大，目前主要有合剂、颗粒剂、煎膏和汤剂等剂型，因此对于四物汤原药材的质量控制显得尤为重要。通过探索四物汤中不同质量的芍药苷溶出情况，可以为四物汤原药材的质量控制提供参考依据。 2、国内外研究概况 邱艳明[11]等采用高效液相色谱（HPLC）法，以乙腈 (A) -0.05%甲酸水溶液 (B)为流动相，选择282nm和230nm为检测波长，建立了一种同时测定5-羟甲基糠醛、川芎嗪、芍药苷和阿魏酸含量的方法, 为四物汤质量控制提供了参考依据。魏学军[12]等首次以芍药苷、没食子酸及多糖类成分三种活性成分作为评价指标, 采用HPLC法、苯酚-硫酸法分别测定其含量，利用正交试验设计对四物汤的提取工艺进行优选，为四物汤的制剂生产及临床应用奠定实验理论基础。李双双[13]等采用RP-HPLC法测定桃红四物汤中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、梓醇、地黄苷A、阿魏酸、芍药苷、原儿茶酸、绿原酸、没食子酸等9种水溶性活性成分的含量，为桃红四物汤的质量控制提供了检测方法。官永河[14]等采用薄层色谱 (TLC) 法鉴别四物汤配方颗粒中的熟地黄、当归、川芎、白芍, 采用高效液相色谱 (HPLC) 法测定四物汤配方颗粒中的芍药苷、阿魏酸的含量，该方法可用于四物汤配方颗粒的质量控制。吴潍[15]等将四物汤分别采用传统砂锅和全自动煎药机进行煎煮，对其浸出物、1w后霉菌数量及阿魏酸、芍药苷和川芎嗪的提取率进行比较，并比较二者对血虚小鼠脾脏指数、外周血象及骨髓细胞增殖指数的影响，结果表明，与传统砂锅比较，全自动煎药机煎煮得到的四物汤可获得更久的保存，更多的有效成分及较好的补虚效应，煎煮四物汤推荐使用全自动煎药机。 郑洁[16]等对四物汤采用煎药前是否浸泡、煎煮不同时间和次数，再采用HPLC法测定汤液中阿魏酸的含量，结果表明，增加煎煮时间、煎煮次数、煎煮前浸泡都能有效提高四物汤中阿魏酸的转化率，特别是二次煎煮对四物汤中阿魏酸的转化率提高较为明显。盛彧欣[17]等采用HPLC法对四物汤共煎液与单煎混合液中的没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸和苯甲酸等主要成分进行含量测定，结果表明，共煎液中没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸的含量均高于单煎混合液,而苯甲酸在四物汤共煎液中的含量低于单煎混合液，说明四物汤合煎可提高有效成分的溶出，降低有毒成分的含量。国外研究表明：当归和白芍更能提高受照小鼠的肠道隐窝的活存率, 熟地、当归、白芍对内源性脾结节的产生更有效, 川芎和白芍能预防射线引起的肠道隐窝细胞凋亡。而四物汤对以上指标均有效[18]。 3、应用前景 中药作用成分复杂，尤其在煎煮过程中各成分之间发生的一系列物理或化学反应都将影响到中药汤剂或制剂的质量，优质的中药饮片是保证中药临床疗效和用药安全的前提。 本课题通过模拟质量差和被提取过的白芍在四物汤中芍药苷的溶出影响，以期为四物汤原药材的质量控制提供参考依据。
参考文献： |
[1] 李冀,谢鸣.方剂学专论[M].北京：人民卫生出版社，2017:122.
[2] 马玉玲,蒋力生,叶明花,曹征,常久.四物汤临床应用文献小考[J].江西中医药,2018,49(05):77-80.
[3]Kojima S，InabaK，Kobayashi S，et al．Inhibitory effects of traditional Chinese medicine Shimotsu-to and its included crude fractions on adjuvant - induced chronicinflammation of mice [J]．Biol Pharm Bull，1996，19 (1)：47．
[4] 邓轶渊,高文远,陈海霞,武珊珊.中药复方合煎与分煎的差异性研究进展[J].中草药,2005(12):1909-1911.
[5] 许益民,陶春洪.当归承气汤中磷脂成分对总蒽醌溶出率的影响[J].中国医院药学杂志,1991,011 (9):391-392.
[6] 郭江玉,孙磊,闫彦,余河水,李薇,张丽娟,宋新波.合煎与单煎对四物汤中4种化学成分溶出量的影响[J].天津中医药大学学报,2017,36(05):374-377.
[7] 吕非非. 川芎饮片不同等级质量评价研究[D].成都中医药大学,2014.
[8] 袁一平. 基于临床调剂质量控制的地黄饮片规格等级研究[D].北京中医药大学,2018.
[9] 石俊英.中药鉴定学[M].北京：中国医药科技出版社，2011:109.
[10] 陆兔林,戴衍鹏,陈彦琳,任玉珍,江云,李林,李伟东,季德.中药饮片产业发展概况及存在问题初探[J].中国食品药品监管,2018(06):17-23.
[11] 邱艳明,刘颖新,刘利利,彭丽英.RP-HPLC法同时测定四物汤中4种活性成分的含量[J].海峡药学,2018,30(05):47-49.
[12] 魏学军,林先燕,李雪营,赵鸿宾,何鑫.综合评分-正交试验法优选四物汤中活性成分的提取工艺[J].亚太传统医药,2018,14(05):42-44.
[13] 李双双,李双,杨建明,李帅,张晓莹,郭春燕,王治宝,薛贵平.RP-HPLC法测定桃红四物汤提取物中9种水溶性活性成分的含量[J].中药新药与临床药理,2017,28(03):364-367.
[14] 官永河,杜兰哲,霍文杰,钟华林,赵径华,陈向东.四物汤配方颗粒的质量标准研究[J].北方药学,2016,13(02):1-3.
[15] 吴潍,陈伟光.四物汤两种煎煮方法的系统对比研究[J].中药材,2016,39(02):375-377.
[16] 郑洁,贾昕,马文龙,张萌,赵锦,赵海峰.不同煎煮条件下四物汤中阿魏酸转化率[J].陕西中医,2012,33(10):1406-1407.
[17] 盛彧欣,果德安.四物汤共煎液与单煎混合液主要成分的含量比较[J].药物分析杂志,2005,25(01):1-4.
[18] Song EunLee, HeonOh,Jung AhYang, Sung KeeJo, etal. RadioprotectiveEffects of Two Traditional Chinese Medicine Prescriptions: Si-Wu-Tang andSi-Jun-Zi-Tang [J].American Journal of Chinese Medicine, 1999, 27:387 396.2. 研究的基本内容和问题
| 1、研究目标 本实验旨在模拟不同质量的白芍饮片与四物汤中其他3味药材配伍，煎煮不同时间后，分别测定四物汤中芍药苷成分的含量，从而分析其不同质量的原药材中芍药苷的溶出情况，进而为四物汤原药材的质量控制提供参考依据。 2、研究内容 2.1 原药材成分含量随煎煮时间的增加而呈梯度降低 将白芍饮片经不同时间的水煮提取后，测定其中芍药苷的含量。 2.2 芍药苷溶出率与煎煮时长的变化关系 将提取过的白芍饮片与其余3味药材共同煎煮，测定不同时长的芍药苷溶出量，分析其含量与原药材的质量关系。 3、拟解决的关键问题 （1）白芍煎煮提取时长与其成分含量保持梯度变化。 （2）四物汤煎煮时长对芍药苷溶出影响的确定。 |
3. 研究的方法与方案
1、研究方法及实验方案1.1 确定处方当归10g，川芎8g，白芍12g，熟地12g。1.2 试验材料 白芍、熟地、当归、川芎均购自浙江金华，经吴健老师鉴定，白芍为毛茛科芍药属植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根；熟地为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Lihosch.)的块根经炮制加工而成；当归为伞形科植物当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels ]的干燥根；川芎为伞形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎。1.3 溶液制备1.3.1对照品 称取芍药苷5.05mg，于25ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀制得0.202mg/L的对照品。1.3.2白芍原液 称取5份重13g的白芍饮片，各加水300ml，煎煮加水不同时间（0、20、30、40、60min）后，弃去药液，分别取1g打粉0.1068g，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超声30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀、滤过，取续滤液用微孔滤膜过滤，即得。1.3.3 供试品 精密称取5份当归、川芎、熟地各10、8、12g，加入白芍饮片，各加水300ml，煎煮不同时间（20、30、60、90min）后，取不同煎煮时长的煎液，滤过，置25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，吸取上清液4ml，加入甲醇6ml，放置2h，超声处理30min，取出，放冷，用60%甲醇补足重量，离心，取上清液，微孔滤膜过滤，即得。1.4 含量测定方法：色谱柱、流动相：乙腈：0.1%磷酸溶液（18:82）；测定波长：230nm、流速：1ml/min、进样量：10μl。精密度试验：取供试品溶液连续进样6次，每次10μl，测定各成分峰面积，得出RSD，检 验仪器精密度。线性考察：精密吸取对照品溶液1、3、5、10、20μl，按照上述色谱条件测定各成分峰 面积，以其峰面积为纵坐标、进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，得出RSD，以检测供试品溶液在24h内的稳定性。样品测定：分别取供试品10μl进样，根据回归方程计算每份样品中芍药苷的含量。1.5 数据整理分析2、技术路线
3、可行性分析
（1）实验室相关的仪器设备以及实验材料较为齐全。（2）实验方法来自多篇文献的参考，经预实验证明该方法可操作性强。（3）指导老师吴健老师在指导学生做中药化学实验方面有专业理论知识和丰富实验经验。（4）学生已完成《无机及分析化学》、《有机化学》、《中药化学》、《田间试验统计学》等基础课程，实践及思考能力强。
4. 研究创新点
| 在查阅大量文献的基础上，总结前人经验，研究原药材含量梯度在四物汤中芍药苷的溶出情况，进而为四物汤的质量控制提供参考依据。 |
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展本实验预计在2018年11月10日-2019年5 月10日完成：（1）2018.11.10-2018.12.30 查阅相关文献，撰写文献综述，制定实验方案。
（2）2019.02.20-2019.02.25 实验材料仪器准备。
（3）2019.03.06-2019.03.15 拟定开题报告。
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