1. 研究目的与意义
内容:利用多重反应检测技术(MRM)定量大分子蛋白质中的HIF-1α蛋白意义:HIF-1α蛋白普遍存在于人体细胞内,其含量的上浮以及下调的研究对于很多缺氧类疾病的治疗有着非常重要的的帮助,并且对于其蛋白水平的抑制,还能够抑制相关促癌基因的表达。
因此定量HIF-1α的研究就显得尤为重要,对研究相关疾病的治疗有着十分积极的意义。
利用MRM定量靶向蛋白质的技术不仅可以用于HIF-1α的研究,对于以后其他多重大分子蛋白质的高效定量也可以提供稳定的技术支持。
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2. 文献综述
单独附在开题报告后面
3. 设计方案和技术路线
1、提取细胞全蛋白,使用BCA法进行蛋白定量。
2、将蛋白样品经SDS-PAGE定量。
3、切取分子量为120KDa处的蛋白质条带,并经胰酶酶解,得到酶解的肽段。
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4. 工作计划
2022年1月~3月12日:查阅文献资料,撰写综述以及开题报告。
3月12日~4月中旬:提取细胞全蛋白,并用BCA法进行蛋白定量,再将样品经SDS-PAGE定量。
4月中旬~4月底:酶解样品并通过RP-HPLC对酶解肽段进行分离。
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5. 难点与创新点
因为HIF-1α在细胞中的含量十分微小,以往靶向定量蛋白质分子所应用的western blot以及ELISA都不能精确定量HIF-1α,并且实验所需的抗体十分的昂贵。
所以我们决定采用多重反应监测技术(MRM)来定量HIF-1α蛋白。
在技术方面多重反应监测技术可以更加精确的定量蛋白质甚至是羟化后的HIF-1α蛋白,并且在科研费用方面也更为廉价。
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