奈氏比色法与凯氏滴定法测定作物氮含量的对比研究开题报告

 2023-02-13 09:46:21

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

粮食作物为人类生产生活提供了丰富的原材料和营养物质,其中,谷物类和豆类含有丰富的蛋白质,可给人类蛋白质需求充足的供给[1]。作物籽粒中蛋白质根据溶解性不同可分为清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。各蛋白质组分含量直接测定十分困难,常根据溶解性不同通过连续流动提取法依次分别提取出各种蛋白,再添加浓硫酸将有机氮消化呈氨态氮,通过测定植株中氨态氮并乘以5.7当作各蛋白组分的含量[2-4]。粮食作物中氮素(蛋白质)的含量准确测定对指导大田作物施肥,评价植物氮素(蛋白质)品质是及其重要的。

凯氏滴定法、杜马斯法、奈氏比色法等为常用测氮方法[5-8]。植株上长时间常用凯氏定氮法来测定氮含量,杜马斯法的发明较凯氏滴定法早50年,起初由于杜马斯法检测样品的量较小,其实际应用非常受限[9-13]。二十世纪五十年代,科研工作者通过不断的改进,使得杜马斯法可以检测到克级的样品,随后设计出杜马斯快速定氮仪,使得杜马斯法在食品、饲料、肥料、土壤、植株等领域的应用得到广泛关注。其特点是快速、高效、无污染测定氮含量,但由于测定仪器设备昂贵亦限制其运用推广[14]。凯氏滴定法是通过蒸馏将消化好的无机氨态氮收集后通过指示剂滴定显色来测定其氮含量,该法虽能较准确测定含氮量,但蒸馏过程繁琐,耗时耗力[15]。奈氏比色法同凯氏滴定法和杜马斯法一样是一种经典的定氮方法,常用于水体中氨态氮测定,已被很多国家纳入水体氨氮测定的国家标准系列中,其发展历程同杜马斯法、凯氏定氮法一样久远。奈氏比色法是将消煮后的含氨态氮的样品同奈氏试剂反应,通过比色来测定氨态氮的含量。该方法成本较低,无需像凯氏滴定法和杜马斯法需要依托较高的成本仪器设备或者繁琐危险的操作过程[16-17]。有关奈氏比色法的研究已将其运用到土壤中氮素养分的测定,同时由于奈氏比色法在不同科研人员的工作努力下得到极大程度的改良,使得其应用技术越来越成熟。但关于其对植株中氮含量、蛋白质含量的测定研究较少[18-20]。本试验拟采用奈氏比色测定谷物类和豆类作物中籽粒各蛋白组分含量,并通过与半微量凯氏法比较来衡量其测定植株氮的准确度和精密度,对奈氏比色法在植株上测氮应用做初步探讨,以期丰富植物籽粒蛋白质含量测定方法,并逐渐完善该测定方法,为植株氮素测定提供借鉴。

参考文献:

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2. 研究的基本内容和问题

本实验通过对奈氏比色法测定作物中氮含量方法条件的研究,比较不同ph值条件下、不同比色时间、不同定容体积条件下测定结果,明确各个影响因素对奈氏比色法测定结果的影响,筛选出最适的条件。并通过同半微量凯氏滴定法比较,确定其测定的准确性和精确度。以及其对样品测定浓度的上限和下限阀值,通过事前稀释或者事后稀释解决样品浓度对奈氏比色结果的影响,最终探究出奈氏比色法在不同作物氮素(蛋白质)含量测定运用。

3. 研究的方法与方案

研究方法:比较试验

技术路线:

通过连续提取法提取不同作物籽粒中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白组分,放置烘箱中烘干,全蛋白测定通过称取定量面粉。添加8ml浓硫酸静置6h后在适当温度下消煮矿化,通过奈氏比色法和凯氏滴定法比较测定各个作物中蛋白组分含量。

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4. 研究创新点

关于作物中氮素(蛋白质)含量的测定,前人已投入较多的研究以及不断的改良。凯氏滴定法、杜马斯法在作物类氮素测定较为广泛;奈氏比色法作物国家测定水体氨氮的标准方法,已有被运用到土壤氮素的测定,但对于植株中氮素的测定研究较少。本试验综合考虑到各种植株测氮已有方法的优缺点,结合到其他领域运用的方法,将土壤和水体测定氨氮的方法运用到植株氮素(蛋白质)含量的测定,旨在降低氮素测定成本、寻找和探索更为简便快捷植株氮素(蛋白质)测定方法。

5. 研究计划与进展

2013年7月,供试材料准备;

2013年8-10,相关文献阅读,资料查阅,技能学习;

2013年11-2014年3月,有序完成试验测定内容,并作初步整理;

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