gma-miR1507a过表达载体的构建及大豆转基因发状根的获得开题报告

 2023-02-14 09:36:19

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

意义:

microRNA(简称miRNA)是一段仅有18-25个核苷酸组成的小RNA,广泛存在于生物体中。miRNA最早是由Lee等[1]在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中发现的。之后,在拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)、水稻(Oryza sativa L.)、玉米(Zea mays L.)等多种植物体内均有大量发现。随着克隆技术的迅速发展,miRNA的研究越来越深入,研究者发现miRNA在植物生长发育等方面起着重要的调节作用。miRNA是一类由内源性的非编码RNA,是一类调控因子,通过对其靶基因 mRNA的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而参与调控植物相关生理活动[2]

大豆(Glycine max L.Merr),原产于中国,是世界主要的食用油和植物蛋白来源之一[3]。如何利用育种知识提高大豆产量在农业科技发展中也占据着越来越重要的地位。大豆生长发育受到很多逆境胁迫,比如干旱、水涝、冷害、盐渍等非生物胁迫以及病虫害的生物胁迫,这些逆境胁迫都会影响到大豆生长发育的不同阶段,导致大豆的产量降低。因此,提高大豆的抗逆性是大豆育种工作中重要的组成部分。miRNA在大豆抗逆性方面的研究也是近年来研究的热点。

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2. 研究的基本内容和问题

目标:

1、克隆miRNA1507(miRNA1507a和miRNA1507b)的前体;

2、构建大豆miRNA1507的过表达载体;

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3. 研究的方法与方案

研究方法:

1、PCR

PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链,低温(经常是60C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。

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4. 研究创新点

较普通的基因克隆而言,miRNA的相关研究较为新颖。而miRNA作为一类重要的调控因子,它在大豆生长发育很多方面都起到了重要的作用和特殊功能,构建大豆miRNA1507过表达载体及获得转基因发状根能为后续研究miRNA1507的功能以及作用机制提供重要的基础。

5. 研究计划与进展

研究计划:

2015年7月-2015年9月:查阅相关文献,了解miRNA的功能和结构以及研究进展,学习相关实验方法并制定自己的实验计划;

2015年9月-2015年12月:构建miRNA1507的过表达载体;

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