转GmAOC3基因大豆T3代抗虫功能验证开题报告

 2023-02-14 09:36:27

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

一、本课题意义大豆是我国重要的植物蛋白和使用脂肪的来源, 但在大豆的整个生育期内常常受到各种病虫害的危害,导致产量和品质下降。

大豆食叶性害虫是以取食大豆叶片组织从而影响大豆生长发育的一类害虫。

据调查,中国有记载的大豆害虫有232种, 其中发生普遍、危害较重的主要是大豆造桥虫、豆天蛾、斜纹夜蛾、豆卷叶螟、大豆蚜虫、烟粉虱、蜷象大豆食心虫、豆英螟等[1]。

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2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标进一步深入探究转GmAOC3大豆T3代植株对斜纹夜蛾的抗性,进一步验证GmAOC3基因的抗虫性功能。

二、研究内容(1)对转基因植株进行阳性检测(2)测定阳性植株目的基因表达量(3)对转基因植株室内喂养斜纹夜蛾进行抗虫性的鉴定三、拟解决的关键问题进一步鉴定出GmAOC3基因的抗虫功能,为大豆抗虫育种提供了新的抗性种质资源,为大豆的抗虫育种做出一定的贡献。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法(1)QuickStix PAT /bar 转基因检测试纸条法初步筛选阳性植株(2)提DNA对目的基因PCR扩增(3)提RNA荧光定量测定目标基因的表达量(4)对阳性植株进行抗虫性鉴定二、技术路线三、实验方案(1)QuickStix PAT /bar 转基因检测试纸条法取少量叶片放入1.5 mL 的离心管中,用研磨棒将叶片研碎,加入500 L 的提取液,搅拌均匀,将试纸条插入混合液中,5 min 后观察结果。

当试纸条出现2条指示带时说明受检植株是阳性植株,否则为阴性植株。

(2)PCR法: 用 CTAB 法提取大豆基因组 DNA 根据检测片段的序列设计引物和设置合适的PCR扩增程序, 具体如下:bar 基因引物: bar-F: 5'CGAGACAAGCACGGT-CAACTT 3',bar-R: 5' AAACCCACGTCATGCCAGTTC3';PCR 反应程序 ( 博尔迪MIX) : 94℃ /3 min,( 94℃ /30 s 63℃ /30 s 72℃ /25 s ) 10 个循环,( 94℃ /30 s 59℃ /30 s 72℃ /25 s) 20 个循环,72℃ /2 min。

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4. 研究创新点

对转基因植株的抗虫性鉴定采用了强迫喂养和选择性喂养两种方法,而不是单一的某一种方法,全面的鉴定了转基因植株的抗虫性。

5. 研究计划与进展

一、 研究计划(1) 2015年6月-8月理论知识和实验操作的学习(2) 2015年9月种植转基因大豆,将培养基中长出的植株移苗到花盆中(3) 2015年10月进行DNA和RNA的检测(4) 2015年11月对阳性植株进行抗虫性鉴定(5) 2016年3月开始撰写论文二、预期进展能够筛选到阳性植株,阳性植株和野生植株相比对斜纹夜蛾具有较高的抗性。

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