1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本项目的研究意义：
本试验为探寻一种快速的、便捷的以及低成本的载体，即通过在载体pXZP008上插入pCLEAN-G265的泛素启动子（Ubi-promoter），从而对pXZP008载体进行改造；利用水稻原生质体瞬时转化体系，将水稻OsAGO2、OsPRMT5基因分别连接到表达载体pXZP008-Ubi上，转入水稻原生质体中，并通过CO-IP验证OsAGO2和OsPRMT5是否存在互作关系[4]，我们将这一方法称为衔接子引物-PCR引入法[5-6]。pXZP008-Ubi质粒的构建及应用为基因重组提供了一个快速有效的手段，也为验证其功能和蛋白互作方面的研究奠定了基础[1]。
国内外研究概况：
2. 研究的基本内容和问题
项目研究目标：
①通过PCR技术克隆出pCLEAN-G265-Ubi，将克隆出的pCLEAN-G265-Ubi连接到目的载体pXZP008上，从而对pXZP008进行改造；②利用水稻原生质体瞬时转化试验，将水稻AGO2、PRMT5基因分别连接到目的载体pXZP008上，转入水稻原生质体中，并通过Western bolt验证OsAGO2和OsPRMT5是否存在互作关系。
研究内容：
3. 研究的方法与方案
研究方法：
本试验通过在载体pXZP008上插入pCLEAN-G265的泛素（Ubi-promoter）启动子，从而对pXZP008载体进行改造；利用水稻原生质体瞬时转化体系，将水稻OsAGO2、OsPRMT5基因分别连接到表达载体pXZP008-Ubi上，转入水稻原生质体中，并通过CO-IP验证OsAGO2和OsPRMT5是否存在互作关系。pXZP008-Ubi质粒的构建及应用为基因重组提供了一个快速有效的手段，也为验证其功能和蛋白互作方面的研究奠定了基础。我们将这一方法称为衔接子引物-PCR引入法。
技术路线：
4. 研究创新点
特色或创新之处
本试验通过在载体pXZP008上插入pCLEAN-G265的泛素（Ubi-promoter）启动子，从而对pXZP008载体进行改造，并通过CO-IP验证OsAGO2和OsPRMT5是否存在互作关系。pXZP008-Ubi质粒的构建及应用为基因重组提供了一个快速有效的手段，也为验证其功能和蛋白互作方面的研究奠定了基础。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
（1）、2016年9月20日-2016年10月5日，克隆pCLEAN-G265-Ubi，并将pCLEAN-G265-Ubi连接到目的载体pXZP008。
（2）、2016年10月6日-2016年10月10日，转入JM109感受态细胞中，涂Amp板，并挑取阳性单菌落送测序，测序正确后进行应用。
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