1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1、本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)环状 RNA(是一种特殊的内源性非编码 RNA( noncoding RNAncRNA) ,是继微小RNA ( microRNA,miRNA)及 长 链 非 编 码RNA( long noncoding RNA,lncRNA) 后的RNA家族又一研究新热点[1- 2]。
Sanger 等[3]在 20 世纪 70 年代发现某些高等植物中存在可致病的单链环状类病毒,这是人类首次发现 circRNA。
随后人们陆续在酵母线粒体、丁型肝炎病毒中发现 circRNA,也发现在小鼠的睾丸内含有性别决定基因( sex-determining region Y,Sry)转录而来的 circRNA,还证实了circRNA 也存在于人体细胞[4-7]。
2. 研究的基本内容和问题
2、研究的目标、内容和拟解决的关键问题本实验将前期在拟南芥circRNA库验证并用生物信息分析到的circRNA4235和circRNA4595,通过农杆菌转化法构建circRNA的突变体和过表达植株,进一步的研究拟南芥中circRNA的生理作用。
3. 研究的方法与方案
3、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析(一) 研究方法构建突变体和过表达载体,转入农杆菌GV3101菌株中,通过农杆菌蘸花转化法构建转基因植株。
(二) 技术路线和试验方案(1)设计circRNA4235和circRNA4595的突变体和过表达的引物;(2)克隆circRNA4235和circRNA4595的突变体和过表达的序列;(3)将circRNA4235和circRNA4595的突变体和过表达的序列构建到pEG201载体上;(4)将构建的载体转入农杆菌GV3101菌株中;(5)通过农杆菌蘸花转化法构建转基因植株;(6)筛选验证纯合子基因植株。
4. 研究创新点
4、特色或创新之处农杆菌蘸花转化法,该方法简单易行;拟南芥作为一种模式植物,具有其它植物无法取代的优点,易获得大量的突变体和基因组资源,在有限的空间内可以大量种植,收获大量的种子。
5. 研究计划与进展
5、研究计划及预期进展2016年9月-2016年10月构建circRNA4235和circRNA4595突变体和过表达载体,并转入到农杆菌GV3101菌株中。
2016年10月-2016年12月将circRNA4235和circRNA4595突变体和过表达载体,通过农杆菌蘸花转化法转入拟南芥中,收到T0代的转基因种子。
2016年12月-2017年2月将T0代的转基因种子种植,并验证,收T1代的转基因种子。
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