1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)国内外研究概况:植物病害会导致产量的巨大损失,对全球粮食安全是一个严重的威胁[1]。
控制植物病害最有效和环保的途径是培育抗病品种[2]。
对植物病害的遗传和分子研究已部分揭示了植物抗病机制和病原菌的侵染策略。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:1、获得OsCHR11基因的突变体2、初步鉴定OsCHR11基因的突变体植株的抗病性研究内容:1、利用CRISPR体系通过农杆菌介导水稻基因转化获得OsCHR11基因的突变体。
2、对OsCHR11基因的突变体抗病表型进行筛选鉴定拟解决的关键问题:初步探究OsCHR11基因在水稻抗病性调控中的功能,为抗病新品种培育提高基因资源。
3. 研究的方法与方案
研究方法:1. 以水稻品种日本晴为背景,通过构建CRISPR载体并进行农杆菌介导的水稻愈伤转化,筛选鉴定纯合突变植株,最终获得目标基因的功能缺失突变株系。
2. 白叶枯病的接种1) 白叶枯细菌培养活化的白叶枯病菌株PXO99(菲律宾6号小种)在牛肉膏蛋白胨培养基(NA培养基,5g蛋白胨,3g牛肉浸膏,1g酵母粉,10g蔗糖,15~18g琼脂粉,加水至1L后调pH值至6.8)划线,28℃下培养3~4天,无菌水稀释至约109个/mL的浓度(比浊法),OD600=0.5,采用剪叶法接菌。
2) 材料培养及接菌鉴定将水稻种子于网袋28℃浸种2天左右,抽芽即可,再催芽一天;选取发芽良好的种子播于盛有营养土的穴盘内,置于塑料方盘水槽中。
4. 研究创新点
特色或创新之处:近些年来,随着CRSPR/Cas9技术在取得了一定的理论和实践成果后,该技术将被广泛应用于植物基因组编辑上。
与第一代ZFNs和第二代TALENs基因编辑系统相比,CRISPR/Cas9系统具有以下方面优势:(1)设计构建简单,适用范围广,成本低。
(2)植物基因编辑特异性较高。
5. 研究计划与进展
1.研究计划2017年8月-2018年1月 水稻愈伤组织培养及农杆菌介导的愈伤转化,并鉴定转基因阳性植株,获得纯合功能缺失突变体。
2018年1月-2018年2月 进行白叶枯菌的接种,统计植株的表型数据。
2018年3月-2018年4月 毕业论文的撰写。
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